[發明專利]抗病原物質的濃度的測定方法

在審

• 申請號: 201711283336.3
• 申請日: 2017-12-06
• 公開（公告）號: CN108008124A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發明（設計）人: 趙靜;陳國創;龐小娟;何成宜;陳志英
• 申請（專利權）人: 中國科學院深圳先進技術研究院
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 齊云

本發明提供了一種抗病原物質的濃度的測定方法，涉及生物技術領域，本發明提供的抗病原物質的濃度的測定方法，將抗病原物質的標準品和待測樣品分別與靶向病原共培養后，檢測靶向病原的存活率，根據待測樣品中的靶向病原存活率對應標準品中的靶向病原存活率，得出抗病原物質的待測樣品的濃度。具有不受樣品中雜蛋白和核酸的影響，誤差小，而且靈敏度高，最低檢測限可低至10pg/mL的優點。同時，該測定方法實驗操作簡單，用時短，可以在數小時內完成。并且，實驗過程只需要靶向病原培養步驟，不需要購買試劑盒或者其他生化試劑，安全性高，不會給實驗操作人員帶來安全隱患。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是涉及一種抗病原物質的濃度的測定方法。

背景技術

1897年，Paul Ehrlich首次提出靶向病原相關抗原的抗體可以用來治療疾病。抗體藥物在治療疾病上具有廣闊的應用前景，成功用于治療腫瘤、自身免疫疾病和感染性疾病等。上世紀60年代，眾多腫瘤組織/細胞特異性抗原被發現，腫瘤相關抗原成為腫瘤治療的研究熱點，也成為抗腫瘤抗體藥物發開的重要靶點。抗體藥物質量控制是研發和生產環節不可忽視的部分，而抗體濃度測定，是質量控制中最重要的環節之一。目前對于抗體藥物而言，濃度的測定方法主要有以下幾種：酶聯免疫吸附法(ELASA)、紫外吸收法、蛋白A親和高效液相色譜法(protein A-HPLC)等。其中，ELISA指將可溶性的抗原或抗體吸附到聚苯乙烯等固相載體上，進行免疫反應的定性和定量方法。ELISA方法靈敏度高，對儀器要求低，可測定的樣本廣泛(包括血清、分泌物、排泄物等)，但是實驗用時較長，操作復雜，方法誤差大，線性范圍窄，適合用于微量樣品檢測。紫外吸收法是指蛋白質分子中某些基團含有共軛雙鍵，使蛋白質具有吸收紫外光的性質。吸收峰在280nm處，而且其吸光度和蛋白質含量成正比。紫外吸收法檢測樣品快速、靈敏，但需要蛋白純度較高，檢測線性范圍窄，且雜蛋白和核酸的存在會干擾檢測結果，對樣品純度和樣品種類有要求。蛋白A親和液相色譜法使通過蛋白A結合抗體Fc段，在低pH值或者高pH值條件下洗脫，從而獲得抗體濃度。蛋白A親和液相色譜法可特異性檢測抗體含量，結果準確，線性范圍廣，但檢測用時長，對樣品基質要求比較高，較適合用于抗體純化樣品和制劑樣品的含量測定。

因此，開發一種實驗用時短、操作簡單、誤差小、對樣品純度和樣品種類無要求的濃度檢測方法，尤為重要。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種抗病原物質的濃度的測定方法，以緩解現有技術中存在的抗病原物質的濃度的測定方法實驗用時長、操作復雜、易受干擾誤差大、對樣品純度和樣品種類要求較高的技術問題。

本發明提供了一種抗病原物質的濃度的測定方法，所述測定方法包括：

將抗病原物質的標準品和待測樣品分別與靶向病原共培養1-12小時，檢測所述靶向病原的存活率，根據所述待測樣品中的靶向病原存活率對應所述標準品中的靶向病原存活率，得出所述抗病原物質的待測樣品的濃度。

進一步地，所述抗病原物質包括抗腫瘤物質或抗微生物物質，所述靶向病原包括腫瘤或微生物。

進一步地，所述抗病原物質包括抗病原抗體或抗病原小分子藥物。

進一步地，所述抗病原抗體為雙靶向抗病原抗體。

進一步地，當所述抗病原物質為抗病原抗體時，所述共培養包括將所述抗病原抗體的標準品和T細胞、抗病原物質的待測樣品和T細胞分別與靶向病原共培養。

進一步地，所述靶向病原與所述T細胞的數量比為1:1-1:15。

進一步地，所述靶向病原帶有熒光標記，通過測定所述靶向病原的熒光值檢測所述靶向病原的存活率。

進一步地，所述熒光標記為熒光素酶標記；

優選地，所述靶向病原穩定轉染熒光素酶基因。