[發明專利]寡褐藻膠裂解酶OalC6的制備方法與應用

有效

• 申請號: 201711282841.6
• 申請日: 2017-12-07
• 公開（公告）號: CN107828809B
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 陳雪紅;李尚勇;韓彥弢
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N9/88;C12N1/21;C12N15/70;C12P19/02;C12R1/19
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1.一種寡褐藻膠裂解酶OalC6，其特征在于根據與Cellulophagasp.SY116基因組中可能的寡褐藻膠裂解酶基因設計如下擴增引物：上游引物5’-CAAAAACATACATTATAC-3’和下游引物5’-CTAATTAATCCTAAATTTTT-3’,以提取的菌株基因組為模板，進行PCR擴增得到寡褐藻膠裂解酶OalC6基因全長序列,PCR條件為：94℃預變性5min，隨后以94℃30s、54.8℃30s、72℃1min30s進行30個循環，最后在72℃延伸10min,經基因測序后，得到寡褐藻膠裂解酶OalC6基因的全核苷酸序列全長2,328bp，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；編碼775個氨基酸，編碼的寡褐藻膠裂解酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，蛋白理論分子量為85.9kDa,能用于生產生物乙醇。

2.包含權利要求1所述寡褐藻膠裂解酶的基因工程菌，其特征在于，該菌株中導入了寡褐藻膠裂解酶基因oalC6，所述的褐藻膠裂解酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.權利要求2所述的產寡褐藻膠裂解酶的基因工程菌的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將寡褐藻膠裂解酶基因oalC6克隆到質粒中，得到重組載體；

(2)將重組載體轉化宿主菌株，得到產寡褐藻膠裂解酶OalC6的基因工程菌。

4.根據權利要求3所述產褐藻膠裂解酶的基因工程菌的構建方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的質粒為pET28a(+)。

5.根據權利要求3所述產褐藻膠裂解酶OalC6的基因工程菌的構建方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的宿主菌為大腸桿菌BL21(DE3)。

6.權利要求1所述寡褐藻膠裂解酶OalC6在裂解褐藻酸鈉和褐藻寡糖中的應用。