[發明專利]一種細胞外基質神經修復膜及其制備方法在審

申請號：	201711282138.5	申請日：	2017-12-07
公開（公告）號：	CN107737374A	公開（公告）日：	2018-02-27
發明（設計）人：	姜紅;任孝敏;李利明	申請（專利權）人：	山東雋秀生物科技股份有限公司
主分類號：	A61L27/36	分類號：	A61L27/36;A61L27/50;A61L27/56
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種細胞基質神經修復及其制備方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種生物醫用技術領域的修復膜，特別涉及一種用于周圍神經損傷修復的細胞外基質神經修復膜及其制備方法。

背景技術

神經系統是人體中最重要的器官，由中樞神經和周圍神經兩大部分組成，中樞神經是指腦和脊髓，周圍神經則是指離開腦和脊髓的神經纖維由結締組織連接、包裹組成粗細不等的神經束的基礎上，再由結締組織進一步包裹而形成的（肉眼可見的）神經束的集合體。周圍神經損傷表現為各種原因引起的受該神經支配的區域出現感覺障礙、運動障礙和營養障礙，只有在受損神經得到修復的情況下，器官的正常功能才能得到完全的恢復。

周圍神經離斷損傷后，能以約1毫米/天的速度從近端向遠端生長，臨床上常通過對離斷神經吻合的方法就行修復，然而神經吻合后仍然會存在如下問題：局部缺乏良好的促進神經纖維生長的微環境，難以形成有利于神經纖維再生的“再生室”效應；吻合口暴露，神經生長因子外流，亦會降低神經的修復效果；纖維組織侵入吻合口形成瘢痕，阻礙再生纖維通過吻合口長入神經遠端；生長受阻的再生纖維極易在局部形成神經纖維瘤子。尋找一種有效的修復材料，提高神經再生的速度和質量，是當前急需解決的問題。

專利（CN201210397806.X）公開了一種促神經修復的材料，通過將雪旺細胞接種于小腸黏膜下層上，共培養獲得復合了雪旺細胞的小腸黏膜下層，經反復凍融后凍干，得到含有神經生長因子的小腸黏膜下層支架。神經修復再生是一個復雜的過程，通過材料提供生長因子，并不能有效促進神經再生。專利（CN201510042570.1）公開了一種神經修復導管其制備方法，該神經修復導管有內外兩層結構，內層為膠原、殼聚糖及其衍生物中的一種或多種復合材料制得，外層由膠原、殼聚糖、絲素蛋白及其衍生物中的一種或者多種復合材料制得，通過這種方式獲得的神經修復導管不具有特異性引導神經再生的功能。專利（CN201510364908.5）公開了一種周圍神經修復膜及其制備方法，由殼聚糖、膠原蛋白、透明質酸、幾丁質、海藻糖、明膠、醋酸纖維素、乙二醇、乙酸、聚磷酸鈣、雙蒸水按照一定的比例制備而成。此種方法制備的神經修復膜不具有特異性引導神經再生的功能。

細胞外基質是由細胞合成并分泌到細胞外間質中的大分子物質，主要由三類成分組成：1.結構蛋白：如膠原、彈性蛋白和基膜粘連蛋白等；2.多糖：如糖胺聚糖、蛋白聚糖、透明質酸和硫酸軟骨素等；3.粘連蛋白：如纖粘連蛋白和層粘連蛋白等，此外，還有一些脂質和生長因子等。將同種或異種組織進行脫細胞等處理后可獲得細胞外基質，將細胞外基質應用于組織修復，為組織細胞提供再生環境，可有效促進組織修復。

發明內容

本發明的目的是提供一種細胞外基質神經修復膜，通過將同種或異種動物周圍神經進行處理后，獲得含有促進神經再生的豐富的結構蛋白、多糖、粘連蛋白及生長因子的神經修復膜，應用于患者周圍神經損傷修復，能夠特異性促進損傷周圍神經的再生。

本發明的另一目的是提供上述細胞外基質神經修復膜的制備方法。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種細胞外基質神經修復膜是由異種動物周圍神經處理得到的膜。作為本發明的一種優選方案，取材周圍神經選自豬、牛、羊、兔、鼠的周圍神經，制得的脫細胞神經基質修復膜為多孔膜，膜厚度為0.05mm~0.5mm。

一種細胞外基質神經修復膜的制備方法，包括以下步驟：

（1）取新鮮動物周圍神經組織，去除附著在神經組織上的筋膜、脂肪等，剪碎成小塊，去離子水清洗3次；

（2）依次使用低溫凍融、曲拉通X-100、過氧乙酸溶液進行脫細胞處理，去除周圍神經組織中的細胞成分；

（3）10倍PBS溶液漂洗至中性，瀝干水分。

（4）將步驟（3）中獲得的固體成分置于鹽酸-氯化鈣溶液中，高速剪碎攪拌均勻后，倒入不銹鋼平面盤中，低溫烘干得到膜。

（5）將步驟（4）中獲得的膜漂洗數次，至中性，冷凍干燥，獲得多孔細胞外基質神經修復膜。

作為本發明的一種優選技術方案，步驟（2）中使用的低溫凍融冷凍溫度為-70℃，冷凍時間大于24h，融化溫度為25℃，循環3次。