[發(fā)明專利]抗EPHA2單鏈抗體、抗CD3E單鏈抗體及融合蛋白及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711278030.9
• 申請日: 2017-12-06
• 公開（公告）號: CN109879965B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李崢;郝中禾
• 申請（專利權(quán)）人: 北京科立思維生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K16/30;C07K19/00;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京東巖躍揚(yáng)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11559
• 代理人: 谷岳

抗EPHA2單鏈抗體、抗CD3E單鏈抗體及融合蛋白及其應(yīng)用。本發(fā)明公開了一種抗跨膜酪氨酸激酶受體的單鏈抗體、一種抗CD3E的單鏈抗體及其融合蛋白及其應(yīng)用，所述融合蛋白具有高度特異性的抗原識別能力，既具有抗體的特異性識別作用，同時又具有優(yōu)異的抗腫瘤效果，其對三種不同類型的腫瘤細(xì)胞系，均有明顯的生長抑制作用，而且該抗體融合蛋白的分子量小，可以在原核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)，大大降低了抗體藥物的生產(chǎn)成本，具有良好的臨床應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明公開了一種抗EPHA2單鏈抗體、抗CD3E單鏈抗體及融合蛋白及其應(yīng)用，屬于免疫學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

腫瘤是威脅人類生存最大的疾病。世界衛(wèi)生組織研究顯示，2012年中國癌癥發(fā)病人數(shù)為306.5萬，約占全球發(fā)病的五分之一；癌癥死亡人數(shù)為220.5萬，約占全球癌癥死亡人數(shù)的四分之一。

腫瘤的形成和發(fā)展具有非常復(fù)雜的調(diào)節(jié)機(jī)制，有非常多的生物效應(yīng)分子參與其中。明晰這些生物效應(yīng)分子的作用機(jī)制，對于腫瘤疾病的預(yù)防和治療具有重要的意義。

EphA2是一個跨膜酪氨酸激酶受體，屬于酪氨酸激酶受體(receptor tyrosinekinases，RTKs)超家族成員之一。EphA2通常以相對較低的水平表達(dá)在成人各種上皮細(xì)胞中，其在介導(dǎo)相應(yīng)的信息傳遞過程中起著關(guān)鍵性的作用，調(diào)控著許多方面的細(xì)胞行為。近來研究顯示，EphA2在多種腫瘤組織中高表達(dá)，進(jìn)一步的研究證實(shí)EphA2過表達(dá)促進(jìn)腫瘤向惡性發(fā)展。因其在正常及腫瘤組織中表達(dá)的差異性，加之其有別于其他RTKs的結(jié)構(gòu)及功能的特異性，目前EphA2被認(rèn)為是一個很有潛力的靶點(diǎn)，正成為各種腫瘤防治研究的焦點(diǎn)。

在許多腫瘤細(xì)胞模型和臨床樣本中，均報道EphA2高水平的表達(dá)，包括乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、肺癌、高侵襲性黑色素瘤、宮頸癌、卵巢癌、惡性間皮細(xì)胞瘤等。并且研究發(fā)現(xiàn)，EphA2的表達(dá)與多種惡性腫瘤的病理分級及臨床分期相關(guān)。

CD3分子是T淋巴細(xì)胞表面抗原和TCR一起活化T細(xì)胞，引起細(xì)胞免疫應(yīng)答。CD3分子由4條不同的鏈組成，其中E鏈?zhǔn)亲鳛閰f(xié)同TCR向胞內(nèi)傳遞活化信號的重要亞基。已上市的人源化CD3抗體OKT3就是特異性針對CD3E鏈的活化抗體。

傳統(tǒng)的治療腫瘤的方法是手術(shù)或者放、化療。隨著近年生物制藥技術(shù)的發(fā)展，一批優(yōu)質(zhì)的抗腫瘤抗體藥物的問世，使得一些難治性腫瘤的生存率大大提高。抗體藥物已作為腫瘤患者常規(guī)的治療藥物之一，預(yù)計2020年，單抗藥物的銷售額將達(dá)到2000億美元。自從1984年第一個基因工程抗體人－鼠嵌合抗體誕生以來，新型基因工程抗體不斷出現(xiàn)，如人源化抗體、單價小分子抗體(Fab、單鏈抗體、單域抗體、超變區(qū)多肽等)、多價小分子抗體(雙鏈抗體，三鏈抗體，微型抗體)、某些特殊類型抗體(雙特異抗體、抗原化抗體、細(xì)胞內(nèi)抗體、催化抗體、免疫脂質(zhì)體)及抗體融合蛋白(免疫毒素、免疫粘連素)等等。另外，用于制備新型抗體的噬菌體抗體庫技術(shù)成為繼雜交瘤技術(shù)之后生命科學(xué)研究中又一突破性進(jìn)展。

對于血液性腫瘤，全分子抗體藥物具有優(yōu)勢，它們可以激活補(bǔ)體和免疫細(xì)胞將血液中游走的腫瘤細(xì)胞殺死，但是對于實(shí)體腫瘤，由于全分子抗體藥物分子量大，進(jìn)入不到實(shí)體瘤內(nèi)部，它們的抗腫瘤效果不理想。而小分子抗體卻可以輕松進(jìn)入實(shí)體瘤內(nèi)部發(fā)揮抗腫瘤作用。未來的抗體藥物將以小分子抗體藥物為主。小分子抗體藥物尤其對中國來說更為必須，因?yàn)樵谥袊喟l(fā)的肺癌、肝癌和消化道系統(tǒng)腫瘤中絕大多數(shù)都是實(shí)體性腫瘤。中國男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位，女性發(fā)病率占第二位，死亡率占第二位。而在肺癌中也有些是死亡率非常高的轉(zhuǎn)移性腫瘤，如肺癌的腦轉(zhuǎn)移發(fā)生率可以達(dá)到35％～50％，多個部位的骨轉(zhuǎn)移發(fā)生率可以達(dá)到50％。對于腦和骨轉(zhuǎn)移的癌癥治療，小分子抗體藥物就可以發(fā)揮其無法替代的抑制轉(zhuǎn)移作用。