[發明專利]以色胺為功能配基的層析介質

在審

• 申請號: 201711277768.3
• 申請日: 2017-12-06
• 公開（公告）號: CN107999035A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發明（設計）人: 瞿歡歡;朱至放
• 申請（專利權）人: 蘇州博進生物技術有限公司
• 主分類號: B01J20/26
• 分類號: B01J20/26;B01J20/28;B01J20/30;B01D15/38
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 韓飛

本案涉及一種以色胺為功能配基的層析介質，包括層析基質和配基，所述的層析基質為親水性多孔微球，配基為經溴乙酰溴活化后偶聯的色胺。本發明抗體吸附容量大，飽和吸附容量可達140mg/ml濕介質，處理能力強；介質性質穩定，采用烯丙基溴活化并偶聯配基，所得介質的配基穩定，清洗再生方便。

技術領域

本發明涉及以色胺為功能配基的層析介質，屬于生物化工領域中的蛋白層析分離技術。

背景技術

親和層析是利用生物分子間專一的親和力而迸行分離的一種層析技術。人們很早就認識到蛋白質、酶等生物大分子物質能和某些相對應的分子專一而可逆的結合，可以用于對生物分子的分離純化。具有專一親和力的生物分子對主要有：抗原與抗體、DNA與互補DNA或RNA、酶與它的底物或競爭性抑制劑、激素(或藥物)與它們的受體、維生素和它的特異結合蛋白、糖蛋白與它相應的植物凝集素等。親和層析中所用的載體稱為基質，與基質共價連接的化合物稱配基。但由于技術上的限制，主要是沒有合適的固定配基的方法，所以在實驗中沒有廣泛的應用。直到60年代末，溴化氰活化多糖凝膠并偶聯蛋白質技術的出現，解決了配基固定化的問題，使得親和層析技術得到了快速的發展。親和層析是分離純化蛋白質、酶等生物大分子最為特異而有效的層析技術，分離過程簡單、快速，具有很高的分辨率，對分離含量極少又不穩定的活性物質尤為有效。在生物分離中有廣泛的應用。多肽配基在實際應用時，有些與抗體相互作用較強，需要酸性或堿性較強的條件才能洗脫，影響抗體活性；有些配基的耐鹽結合能力較弱，料液需要稀釋。因此，開發性能更優良的多肽配基親和介質，縮短肽鏈長度，提高抗體吸附容量，且具有耐鹽吸附特性，洗脫條件溫和，對于抗體的規模化制備具有重要的意義。

發明內容

針對現有技術中存在的技術問題，本案提供一種以精氨酸為功能配基的層析介質。

為實現上述目的，本案通過以下技術方案實現：

一種以色胺為功能配基的層析介質，其中，包括層析基質和配基，所述的層析基質為親水性多孔微球，配基為經溴乙酰溴活化后偶聯的色胺。

優選的是，所述的以色胺為功能配基的層析介質，其中，所述的層析基質為具有多孔結構和表面羥基的親水性微球。

優選的是，所述的以色胺為功能配基的層析介質，其中，所述的層析基質以聚甲基丙烯酸縮水甘油酯微球為內核，在所述聚甲基丙烯酸縮水甘油酯微球表面鍵合有纖維素分子。

優選的是，所述的以色胺為功能配基的層析介質，其中，所述的層析介質的配基密度為100-150μmol/ml。

以色胺為功能配基的層析介質的制備方法，其中，包括如下步驟：

1)將層析基質抽干后，加入0.2-1倍層析基質質量的體積百分比為25％的二甲基亞砜、0.5-1倍層析基質質量的溴乙酰溴和0.6-1倍層析基質質量的氫氧化鈉，30℃下200rpm搖床中活化10-40小時，抽濾，用去離子水洗滌得到活化層析基質；

2)將活化層析基質和0.3-0.7倍活化層析基質質量的N-溴代丁二酰亞胺混合進行溴代醇化，30℃下200rpm搖床中反應2小時，抽濾，用去離子水洗滌，得到溴代醇化的層析基質；

3)將溴代醇化的層析基質和0.8-1倍溴代醇化的層析基質質量的色胺以及0.5-1M碳酸鈉緩沖液混合，碳酸鈉緩沖液的pH為10-12，25℃下200rpm搖床中反應8-24小時，得到色胺偶聯后的介質；

4)將色胺偶聯后的介質依次用N-甲基吡咯烷酮、無水乙醇和去離子水清洗，抽濾，加入到乙酸胺中，25℃下水浴搖床中反應3-5小時，去離子水洗滌，得到以精氨酸為功能基團的親和層析介質。

本發明的有益效果是：

(1)抗體吸附容量大，飽和吸附容量可達140mg/ml濕介質，處理能力強。