[發明專利]以4-嘧啶基-2-苯胺為功能配基的親和層析介質在審

申請號：	201711276403.9	申請日：	2017-12-06
公開（公告）號：	CN107999025A	公開（公告）日：	2018-05-08
發明（設計）人：	瞿歡歡;朱至放;周青竹	申請（專利權）人：	蘇州博進生物技術有限公司
主分類號：	B01J20/22	分類號：	B01J20/22;B01J20/30;B01D15/38;C07K1/22
代理公司：	北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369	代理人：	韓飛
地址：	215000 江蘇省蘇州***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	嘧啶苯胺功能親和層析介質
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【說明書】：

本案涉及一種以4?嘧啶基?2?苯胺為功能配基的親和層析介質，其特征在于，包括層析基質和配基，所述的層析基質為大孔β?環糊精微球，配基為經一縮二乙二醇雙縮水甘油醚活化后偶聯的4?嘧啶基?2?苯胺。本發明所研制的新型層析介質，以4?嘧啶基?2?苯胺為功能配基，具有顯著的疏水性電荷誘導層析分離特點，對抗體具有很高的吸附能力，可以用于抗體的規模化制備。

技術領域

本發明涉及一種以4-嘧啶基-2-苯胺為功能配基的親和層析介質，屬于生物化工領域中的蛋白層析分離技術。

背景技術

抗體能與相應抗原特異性結合，產生各種免疫效應。隨著生物技術的迅猛發展和抗體工程技術不斷突破，單克隆抗體、多克隆抗體以及基因工程抗體已經廣泛應用于生物學和醫學領域。抗體用途主要包括疾病治療、體外診斷和檢測、腫瘤定位顯像以及作為親和配基用于分離純化等。

抗體產品往往純度要求較高，同時還必須保持生物活性，因此傳統的分離過程往往難以滿足要求。蛋白A或蛋白G親和層析介質能夠特異性結合抗體，但蛋白類親和配基易被料液中蛋白酶降解脫落，污染產品，且重復使用次數低，介質價格昂貴，操作成本極高，限制了其大規模應用。而傳統的離子交換層析和疏水相互作用層析等方法雖然能夠結合抗體，但是特異性和選擇性較差，分離步驟多，純化效果有限。因此，開發具有抗體選擇性的非蛋白類配基成為研究熱點。

發明內容

針對上述不足之處，本發明的目的在于提供一種以4-嘧啶基-2-苯胺為功能配基的親和層析介質。

一種以4-嘧啶基-2-苯胺為功能配基的親和層析介質，其中，包括層析基質和配基，所述的層析基質為大孔β-環糊精微球，配基為經一縮二乙二醇雙縮水甘油醚活化后偶聯的4-嘧啶基-2-苯胺。

優選的是，所述的以氨基苯并咪唑為功能配基的層析介質，其中，所述的層析介質的配基密度為30-160μmol/ml。

優選的是，所述的以4-嘧啶基-2-苯胺為功能配基的親和層析介質的制備方法，其中，包括如下步驟：

1)將層析基質抽干后，加入0.5-2倍層析基質質量的體積百分比為30％的二甲基亞砜、0.8-1.6倍層析基質質量的一縮二乙二醇雙縮水甘油醚和0.1-1倍層析基質質量的氫氧化鈉，40℃下200rpm搖床中活化5-10小時，抽濾，用去離子水洗滌得到環氧活化層析基質；

2)將環氧活化層析基質和0.4-0.8倍層析基質質量的4-嘧啶基-2-苯胺以及0.5-1M碳酸鈉緩沖液混合，50℃下200rpm搖床中反應8-24小時，反應結束后，用去離子水洗滌得到4-嘧啶基-2-苯胺偶聯后的介質。

4、如權利要求3所述的以4-嘧啶基-2-苯胺為功能配基的親和層析介質的制備方法，其特征在于，所述一縮二乙二醇雙縮水甘油醚與層析基質的質量比為0.8-1.6:1。

優選的是，所述的以4-嘧啶基-2-苯胺為功能配基的親和層析介質的制備方法，其中，所述碳酸鈉緩沖液的pH為11-13。

本發明的有益效果是：

(1)抗體吸附容量大，飽和吸附容量可達150mg/ml濕介質，處理能力強；

(2)洗脫方便，4-嘧啶基-2-苯胺配基的pKa為4.6，通過調節溶液pH至5附近就可實現完全洗脫，避免過酸、過堿或高鹽等對蛋白結構產生不良影響或活性損失；