[發(fā)明專利]一種海帶配子體性別鑒定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711272328.9
• 申請(qǐng)日: 2017-12-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108034742B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李曉捷;崔翠菊;李言;劉延嶺;彭捷;武瑞娜;孫娟;羅世菊;姜黎明;趙聚萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東東方海洋科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 煙臺(tái)炳誠(chéng)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 37258
• 代理人: 李慧

1.一種海帶配子體性別鑒定方法，其特征是，海帶雌配子體和雄配子體特異性分子標(biāo)記各一個(gè)，分別命名為SJF和SJM，

SJF核苷酸序列為：

SJM核苷酸序列為：

其中SJF由引物對(duì)Sf擴(kuò)增得到，引物對(duì)Sf的序列為：

上游引物5’- GGCCTTCAATCAAGCCAATA -3’

下游引物5’- AAAGTCCACACCGTCGTTTC-3’

SJM由引物對(duì)Sm擴(kuò)增得到，引物對(duì)Sm的序列為：

上游引物5’-TAGCATCTTGTTGATCTCGTTG-3’

下游引物5’-CAAGGATAAGCGACCAACTTAC-3’；

具體操作步驟為：

（1）根據(jù)水云的性別決定區(qū)域堿基序設(shè)計(jì)多對(duì)引物對(duì)，從中篩選出了擴(kuò)增條帶穩(wěn)定，雌、雄特異的兩組引物對(duì)，利用這兩對(duì)引物對(duì)分別對(duì)海帶雌、雄配子體基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；雌特異引物對(duì)序列為：

上游引物5 ’-GTTGGTATAACGGCGTTGGA-3’

下游引物5’-CACCTCCCCTTAAAGTTGCGGC-3’

雄特異引物對(duì)序列為：

上游引物5’-GTGGCCTTCTCTTCGTAGGT-3’

下游引物5’-TCGTCAAGGATAAGCGACCA-3’；

（2）利用pMD18-T載體、大腸桿菌感受態(tài)菌株DH5α，進(jìn)行克隆 ，挑選白色菌落，使用PCR確認(rèn)載體中插入片段的大小，將含有目的片段的菌液進(jìn)行測(cè)序，根據(jù)測(cè)序結(jié)果，設(shè)計(jì)多對(duì)引物對(duì)，再選擇實(shí)驗(yàn)室保存的多個(gè)品種的已知性別的雌 雄配子體克隆進(jìn)行驗(yàn)證；從中篩選出條帶擴(kuò)增穩(wěn)定，大小合適的雌、雄特異引物對(duì)各一組，分 別為雌特異引物對(duì)Sf和雄特異引物對(duì)Sm，對(duì)應(yīng)的分子標(biāo)記分別為SJF和SJM。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海帶配子體性別鑒定方法，其特征是，是通過(guò)檢測(cè)上述的特異性分子標(biāo)記來(lái)完成的；其步驟包括待檢測(cè)的海帶配子體基因組DNA的提取、PCR擴(kuò)增、擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海帶配子體性別鑒定方法，其特征是，用引物對(duì)Sf進(jìn)行擴(kuò)增，從海帶雌配子體基因組DNA中擴(kuò)增得到一條大小為512bp的特異條帶，而且，此擴(kuò)增條帶僅在海帶雌配子體基因組DNA擴(kuò)增中出現(xiàn)，在海帶雄配子體基因組DNA中沒(méi)有此擴(kuò)增條帶；用引物對(duì)Sm進(jìn)行擴(kuò)增，從海帶雄配子體基因組DNA中擴(kuò)增得到一條大小為300bp的特異條帶，而且，此擴(kuò)增條帶僅在海帶雄配子體基因組DNA擴(kuò)增中出現(xiàn)，在海帶雌配子體基因組DNA擴(kuò)增中沒(méi)有此條帶。