[發明專利]一種基于雙分子熒光互補技術的Myo檢測試劑盒、制備及使用方法

在審

• 申請號: 201711271893.3
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN108267595A
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: 徐林
• 申請（專利權）人: 南京天縱易康生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種基于雙分子熒光互補技術的Myo檢測試劑盒、制備及使用方法。所述試劑盒包括：抗Myo抗體偶聯的熒光蛋白N端片段、抗Myo抗體偶聯的熒光蛋白C端片段；本發明還公開了所述一種基于雙分子熒光互補技術的Myo診斷試劑盒的制備方法，該方法包括：抗Myo抗體偶聯的熒光蛋白N端片段的制備、抗Myo抗體偶聯的熒光蛋白C端片段的制備；最后還公開了該試劑盒的使用方法；本發明試劑盒具有特異性好、操作方便、檢測快速、線性范圍寬、免清洗、準確度高等優點，便于臨床檢測使用，其應用于急性心肌梗死的監測，可以提高急性心肌梗死診斷的準確率，具有極大的市場價值。

技術領域

本發明涉及一種雙分子熒光互補技術用于體外免疫診斷檢測人體內Myo的含量，屬于疾病診斷檢測領域。

背景技術

急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction，AMI)是世界上發病率和死亡率較高的疾病之一。據最近美國心臟病協會數據顯示，2003年美國有720萬AMI患者。但同時AMI又是高誤診率的疾病之一，一些確實患有AMI的患者沒有得到恰當的處理，導致較高的死亡率；而另一些非AMI患者又接受了不必要的治療，引起不必要的花費。世界衛生組織推薦：典型的胸痛、心電圖改變和心肌酶異常三項指標中有兩項符合，即可診斷AMI。但許多AMI患者早期沒有典型的臨床癥狀和心電圖的異常改變，因此心肌損傷標志物的檢測就顯得尤為重要。近年來心肌標志物在臨床中的應用得到了越來越廣泛的重視，其發展也相當迅速，在臨床中出現了很多心肌標志物。

肌紅蛋白(Myoglobin，Myo)是一種氧結合血紅素蛋白，主要分布于心肌和骨骼肌組織。 1960年由Kendrew用X線衍射法闡明，這是世界上第一個被描述的蛋白質三級結構。Myo 由一條珠蛋白多肽鏈和一個血紅素輔基組成，能可逆的與氧結合，有儲存運輸氧的能力，正常人血清中Myo含量非常少，AMI期間快速釋放，癥狀發作后1h血中即見升高，2～4h內達正常上限10倍左右，5～10h達高峰，約30h回到基線，與CK-MB比較，出現時間更早，而恢復則較慢，在急性心肌梗死早期診斷中具有重要價值。研究表明Myo對AMI診斷的敏感性和特異性分別為100％、86.7％，Myo陰性預期值最高(100％)，雖然Myo心肌特異性不高，但由于敏感性高，Myo陰性特別有助于排除AMI的診斷。由于Myo的血中半衰期短，所以又有助于觀察AMI病程中有無再梗死發生以及梗死有無擴。

常用的Myo檢測方法有金標定性試驗、熒光免疫法、聯免疫吸附試驗(ELISA)和磁微粒化學發光法(CMIA)。金標定性實驗快速，但該方法靈敏度低、無法動態監測Myo含量的變化。熒光免疫法操作復雜，對操作環境和操作人員有較高的要求。ELISA法的檢測靈敏度較低，目前主要應用于傳染性疾病篩查等對檢測靈敏度要求較低的項目，并且反應時間較長。CMIA法是從ELISA法改進而來，與ELISA法相比具有操作簡單，檢測速度快等特點，但是CMIA法是非均相反應，操作過程需要清洗，這降低了檢測的可重復性。

為解決上述問題，如果能利用Myo的抗體，以雙分子熒光互補技術為平臺，研發出一種針對心肌梗死疾病診斷的Myo快速檢測試劑。使其與現有檢測試劑相比，具有操作方便、靈敏度高、免清洗、精密度高等優點；將其應用于急性心肌梗死的監測，可以提高急性心肌梗死診斷的準確率，則會受到市場的廣泛歡迎和具有極大的市場價值。

發明內容

針對現有技術中存在的技術問題，本發明提供一種可用于定量檢測Myo的檢測試劑盒、其制備及使用方法。

本發明通過以下技術方案實現：

一種制備基于雙分子熒光互補技術Myo檢測試劑盒的方法，包括如下步驟：

1)抗Myo抗體偶聯熒光蛋白N端片段；

2)抗Myo抗體偶聯熒光蛋白C端片段；

在上述技術方案中，所述抗Myo抗體為針對Myo不同表位的單克隆抗體或多克隆抗體。