[發明專利]一種類蛇毒三肽的液相合成方法

在審

• 申請號: 201711270645.7
• 申請日: 2017-12-05
• 公開（公告）號: CN107936108A
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發明（設計）人: 張忠旗;王萬科;陳科;高長波;張博;王昕;楊小琳;趙金禮
• 申請（專利權）人: 陜西慧康生物科技有限責任公司
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C07K5/083;C07K1/02
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司61201
• 代理人: 高雪霞

1.一種類蛇毒三肽的液相合成方法，其特征在于所述方法由以下步驟組成：

(1)合成Boc-β-Ala-Pro-OMe

以硝基甲烷為溶劑，將Boc-β-Ala-OH、三乙胺、N-乙基-5-苯基異噁唑-3’-磺酸內鹽、H-Pro-OMe·HCl在室溫條件下攪拌反應10～12小時，得到Boc-β-Ala-Pro-OMe；

(2)合成Boc-β-Ala-Pro-OH

將Boc-β-Ala-Pro-OMe加入四氫呋喃與甲醇、質量分數為5％～10％的LiOH水溶液體積比為2:1:1的混合溶液中，室溫攪拌反應2～4小時，用1mol/L鹽酸調節pH至4～5，旋轉蒸發濃縮，濃縮液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相用無水硫酸鈉干燥后減壓濃縮，干燥，得到Boc-β-Ala-Pro-OH；

(3)合成Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-OMe

按照步驟(1)的方法將Boc-β-Ala-Pro-OH、三乙胺、N-乙基-5-苯基異噁唑-3’-磺酸內鹽和H-DAB(Boc)-OMe·HCl反應，得到Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-OMe；

(4)合成Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-OH

按照步驟(2)的方法用四氫呋喃與甲醇、質量分數為5％～10％的LiOH水溶液體積比為2:1:1的混合溶液處理Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-OMe，得到Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-OH；

(5)合成Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl

以四氫呋喃為溶劑，將Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-OH、1-羥基苯丙三唑、N,N-二異丙基碳二亞胺、芐胺在氮氣保護下攪拌反應2～4小時，旋轉蒸發除四氫呋喃，加入用乙酸乙酯溶解，用0.5mol/L鹽酸溶液洗滌2次，水洗滌至中性，有機相減壓濃縮至干，得到Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl；

(6)合成H-β-Ala-Pro-DAB-NH-Bzl

將Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl加入三氟乙酸與水體積比為95:5的混合液中，室溫攪拌反應1小時，濃縮反應液，將濃縮液加入冷乙醚中析出沉淀，離心除去上清，沉淀經乙醚洗滌、離心后真空干燥，得到H-β-Ala-Pro-DAB-NH-Bzl粗品；將H-β-Ala-Pro-DAB-NH-Bzl粗品經HPLC純化、冷凍干燥，得到H-β-Ala-Pro-DAB-NH-Bzl，即類蛇毒三肽。

2.根據權利要求1所述的類蛇毒三肽的液相合成方法，其特征在于：在步驟(1)中，所述Boc-β-Ala-OH和三乙胺、N-乙基-5-苯基異噁唑-3’-磺酸內鹽、H-Pro-OMe·HCl的摩爾比為1:2～2.4:1～1.5:1。

3.根據權利要求1所述的類蛇毒三肽的液相合成方法，其特征在于：在步驟(3)中，所述Boc-β-Ala-Pro-OH、三乙胺、N-乙基-5-苯基異噁唑-3’-磺酸內鹽、H-DAB(Boc)-OMe·HCl的摩爾比為1:2～2.4:1～1.5:1。

4.根據權利要求1所述的類蛇毒三肽的液相合成方法，其特征在于：在步驟(5)中，所述Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-OH、1-羥基苯丙三唑、N,N-二異丙基碳二亞胺、芐胺的摩爾比為1:2.5～4:2.5～4:2。