[發(fā)明專利]一種人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育金魚的頭形性狀純種系培育方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711270220.6
• 申請日: 2017-12-05
• 公開（公告）號(hào): CN107691309B
• 公開（公告）日: 2022-12-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃鎮(zhèn);陳多;岑萬;周翊濤;黃祖新
• 申請（專利權(quán)）人: 福州春園鯉水族有限公司
• 主分類號(hào): A01K61/10
• 分類號(hào): A01K61/10;A01K61/17
• 代理公司: 廈門原創(chuàng)專利事務(wù)所(普通合伙) 35101
• 代理人: 黃巧香

1.一種人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育金魚的頭形性狀純種系培育方法，其特征在于：

1）人工排精

采用青灰色性腺成熟雄性鯉魚作為親魚，先按每尾注射2 ～3 μg促黃體生成激素釋放激素，再以每kg魚重注射500 ～800 U人絨毛膜促性腺激素促排精, 10 h后采集精液，使用以60～80倍數(shù)的Hank's液對采集精液進(jìn)行稀釋，得到精子稀釋液；

2）精子滅活

利用常壓室溫等離子體的育種儀分批次對精子稀釋液進(jìn)行精子失活處理，得到失活精子液，合并后于-2～4℃低溫避光保存?zhèn)溆帽４妫缓喜⑶懊?0μL失活精子液中加入5μL 0.6M甘露醇、10μL Hank's 液；

3）干法受精

準(zhǔn)備一只經(jīng)消毒的瓷盆，用干的軟毛巾擦干具有目標(biāo)頭形性狀的雌性金魚魚體表面，用大拇指和食指由胸鰭向臀鰭方向輕擠腹部，使魚卵排入瓷盆中，一邊倒入失活精子液，一邊用干凈的毛筆在失活精子液中輕輕攪動(dòng)，使精子和卵子充分接觸，2～3min 后將受精卵均勻鋪灑在孵化缸的魚巢上；

4）雌核發(fā)育二倍體化

在孵化缸中將細(xì)胞松弛素B溶液降溫至 0～4℃溫度，將魚巢上受精卵在細(xì)胞松弛素B溶液中持續(xù)浸泡20-30分鐘，之后放回23-26℃水溫的孵化池進(jìn)行自然孵化；

5）雌核發(fā)育二倍體化的金魚個(gè)體篩選：

經(jīng)過判定雌核發(fā)育已經(jīng)達(dá)到二倍體化后，繼續(xù)孵化培養(yǎng), 經(jīng)過50～100天孵化培養(yǎng)，體色轉(zhuǎn)變，棄去青灰色的金魚苗個(gè)體；

6）建立目標(biāo)頭形性狀的F1代金魚

將金魚苗個(gè)體移入育苗池中進(jìn)一步培育, 期間不斷剔除掉非目標(biāo)頭形性狀雌核發(fā)育的金魚苗，保留目標(biāo)頭形性狀魚苗個(gè)體,繼續(xù)培育到2～4齡，得到目標(biāo)頭形性狀的F1代金魚；

7）目標(biāo)頭形性狀F2代金魚純種系的培育

以F1代雌性金魚、體色為青灰色的雄性鯉魚為親魚，重復(fù)1）-5）的步驟，得到目標(biāo)頭形性狀的F2代金魚純種系。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育金魚的頭形性狀純種系培育方法，其特征在于所述的精子失活處理，其條件為:精子稀釋液上樣量20μL，處理輸出功率125 W，氣體流速10 L·min^{－ 1}，輻照距離2 mm，處理時(shí)間為20～60 s。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育金魚的頭形性狀純種系培育方法，其特征在于所述的判定，其方法為：自然孵化過程金魚卵發(fā)育至原腸晚期時(shí), 取50個(gè)以上的胚胎, 用0.75% NaCl清洗一次, 去卵膜后置于5 ml刻度離心管中, 吸打成細(xì)胞懸液, 加入終濃度達(dá)0.5～1μg/ml的秋水仙堿，處理1～3小時(shí)后按常規(guī)方法制片、染色，檢查染色體二倍化率達(dá)到95%。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育金魚的頭形性狀純種系培育方法，其特征在于所述的細(xì)胞松弛素B溶液，其濃度為40～60ppm。