[發明專利]一株巨大芽孢桿菌、其多肽農用微生物菌劑及制備方法與應用

有效

• 申請號: 201711268957.4
• 申請日: 2017-12-05
• 公開（公告）號: CN107794240B
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 邢芳芳;胡兆平;范玲超;高明夫
• 申請（專利權）人: 金正大生態工程集團股份有限公司;廣東金正大生態工程有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P1/04;C05G3/80;C05G3/00;C12R1/11
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 張宏松

1.一種多肽農用微生物菌劑的制備方法，包括步驟如下：

（1）功能菌枯草芽孢桿菌種子液制備

A、用LB斜面培養基將枯草芽孢桿菌菌株活化，得活化的枯草芽孢桿菌菌株；所述的枯草芽孢桿菌為購自中國農業微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為ACCC NO.11025的枯草芽孢桿菌菌株p-1；

B、將活化的枯草芽孢桿菌菌株接種到液體種子培養基中，于32-37℃下培養16-24h，得到枯草芽孢桿菌種子液，備用；

（2）功能菌巨大芽孢桿菌種子液制備

a、用LB斜面培養基將巨大芽孢桿菌菌株活化，得活化的巨大芽孢桿菌菌株；所述的巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）菌株HB，于2016年1月7日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號為：CGMCC NO.11961；

b、將活化的巨大芽孢桿菌菌株接種到液體種子培養基中，于32-37℃下培養16-24h，得到巨大芽孢桿菌種子液，備用；

（3）預處理混合料的制備

按比例，取豆粕粉、秸稈粉、麥麩、酒糟和玉米粉混合均勻，豆粕粉、秸稈粉、麥麩、酒糟和玉米粉的重量份如下：豆粕粉40-80份，秸稈粉6-28份，麥麩5-22份，酒糟5-20份，玉米粉5-15份；加水調整含水率至60-70wt%，于20-35℃條件下靜置8-24小時，然后于溫度115-121℃下蒸煮20-40min，冷卻后得預處理混合料，備用；

（4）取步驟（3）制得的預處理混合料，按質量百分比為8-30wt%的接種量接入步驟（1）制備的枯草芽孢桿菌種子液，混合均勻，在溫度為32-36℃條件下發酵24-30小時，攪拌均勻；

（5）然后按照質量百分比為12-18wt%的接種量接入步驟（2）制備的巨大芽孢桿菌種子液，混合均勻，提高溫度至38-42℃，繼續發酵24-48小時，發酵結束后降溫至室溫，干燥、粉碎后，制得本發明的富含高含量活菌、復合氨基酸及活性肽的農用微生物菌劑。

2.根據權利要求1所述的多肽農用微生物菌劑的制備方法，其特征在于，步驟（1）、（2）中所述的LB斜面培養基的組分及重量百分比如下：胰蛋白胨0.8-1.2%，酵母提取物為0.4-0.6%，氯化鈉0.4-0.6%，瓊脂粉1.5-2.0%，其余為水，pH值為7.2。

3.根據權利要求1所述的多肽農用微生物菌劑的制備方法，其特征在于，步驟A和步驟a中，所述的活化為挑取單菌落在LB培養基斜面培養基上37℃培養18-24h；步驟B和步驟b中所述的液體種子培養基組分及其重量百分比如下：葡萄糖2.0-3.0%，玉米漿干粉1.1-1.8%，黃豆粉1.5-4.0%，酵母浸膏0.1-0.2%，磷酸二氫鉀0.01-0.03%，氯化鈉0.01-0.02%，硫酸鎂0.01-0.02%，其余為水，pH值為7.0-7.3。

4.根據權利要求1所述的多肽農用微生物菌劑的制備方法，其特征在于，步驟（4）中枯草芽孢桿菌種子液的接種量為10-20wt%，發酵溫度為34-36℃，發酵時間為26-30小時。

5.根據權利要求1所述的多肽農用微生物菌劑的制備方法，其特征在于，步驟（5）中巨大芽孢桿菌種子液的接種量為14-18wt%，發酵溫度為40-42℃，發酵時間為40-48小時。

6.根據權利要求1所述的多肽農用微生物菌劑的制備方法，其特征在于，步驟（5）中干燥溫度為50-110℃，步驟（3）中所述的秸稈粉為玉米秸稈粉、小麥秸稈粉或水稻秸稈粉中一種或兩種以上任意混合，所述的秸稈粉、酒糟的粒徑小于等于0.6cm，所述的麥麩、豆粕粉、玉米粉的粒徑為0.4-1mm。

7.根據權利要求1所述的多肽農用微生物菌劑的制備方法，其特征在于，步驟（1）制得的枯草芽孢桿菌種子液中活菌數為5.0×10⁹-1.5×10¹⁰CFU/ml，步驟（2）制得的巨大芽孢桿菌種子液中活菌數為1.2×10⁹ -8.6×10⁹CFU/ml。