[發(fā)明專利]干細(xì)胞標(biāo)志物CD133干擾核酸在制備抑制腫瘤增殖制劑中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711268940.9
• 申請(qǐng)日: 2017-12-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109864994A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏湲顏;江建海;劉嬋娟;李亦楠;邢洋;楊帆;陳曉寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K31/7105
• 分類號(hào): A61K31/7105;A61P35/00;A61P1/16
• 代理公司: 上海元一成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，涉及干細(xì)胞標(biāo)志物CD133干擾核酸在制備抑制肝癌增殖制劑中的應(yīng)用，及其在制備肝癌的輔助治療藥物或試劑中的用途。本發(fā)明通過(guò)磁珠分選的方法在Huh7和PLC/PRF/5肝癌細(xì)胞中，分選出了CD133⁺的肝癌干細(xì)胞，然后用shCD133?1和shCD133?2兩個(gè)針對(duì)CD133不同序列的shRNA，分別敲低了Huh7?CD133⁺細(xì)胞和PLC/PRF/5?CD133⁺細(xì)胞中的CD133的表達(dá)，以不針對(duì)任何人源基因序列的shLacz做對(duì)照，證明了shRNA序列對(duì)CD133蛋白表達(dá)的有效干擾，并且敲低CD133的蛋白表達(dá)。通過(guò)體外干細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)和裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)證實(shí)了CD133⁺細(xì)胞中敲低CD133的表達(dá)后，顯著抑制細(xì)胞的自我更新和增殖能力。所述CD133干擾核酸可用于制備抑制肝癌增殖制劑以及制備肝癌的輔助治療藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，涉及CD133干擾核酸的醫(yī)用新用途，具體涉及干細(xì)胞標(biāo)志物CD133干擾核酸在抑制肝癌增殖中的應(yīng)用，及其在制備肝癌的輔助治療藥物或試劑中的用途。

背景技術(shù)

資料顯示，在我國(guó)，肝癌是最常見(jiàn)并且死亡率極高的惡性腫瘤之一。臨床研究顯示，肝癌在早期沒(méi)有典型的癥狀，大多數(shù)病人在感到身體不適并確診時(shí)，已經(jīng)是肝癌的晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳的治療時(shí)期。目前臨床上的治療手段也比較有限，主要依賴于手術(shù)切除、化療和少數(shù)的肝移植，所以，導(dǎo)致肝癌死亡率居高不下的原因是：缺乏肝癌早期診斷的靈敏標(biāo)志物，待晚期發(fā)現(xiàn)時(shí)已無(wú)法進(jìn)行手術(shù)切除治療；對(duì)肝癌發(fā)生和發(fā)展的遺傳特征和分子機(jī)制了解的不清楚，使得化療的抵抗不可避免。因此，深入研究肝癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制對(duì)于臨床診療方案改進(jìn)和病人預(yù)后的改善非常重要。

越來(lái)越多的研究表明，腫瘤中存在著很小一部分具有干細(xì)胞特性的腫瘤干細(xì)胞。腫瘤干細(xì)胞有著自我更新、增殖、分化、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移和維持自身處于靜息期等能力，是腫瘤發(fā)生、發(fā)展、放化療抵抗、轉(zhuǎn)移以及復(fù)發(fā)的“種子細(xì)胞”。具有5次跨膜結(jié)構(gòu)的糖蛋白CD133于1997年被發(fā)現(xiàn)，后續(xù)研究表明，CD133分子是正常干細(xì)胞和多種腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物，CD133分子被廣泛用于分選各種實(shí)體瘤中的腫瘤干細(xì)胞。諸多研究證實(shí)，CD133表達(dá)的腫瘤細(xì)胞有著顯著增強(qiáng)的成瘤、侵襲和和耐藥等能力，腫瘤中CD133的高表達(dá)預(yù)示著腫瘤病人更差的預(yù)后。因此，CD133分子有望成為腫瘤預(yù)后判斷的新指標(biāo)和靶向腫瘤干細(xì)胞治療的新靶點(diǎn)。

有研究顯示，在肝癌中，CD133高表達(dá)的病人預(yù)后更差，肝癌細(xì)胞系中分選出來(lái)的CD133⁺細(xì)胞具有更強(qiáng)的自我更新、增殖和成瘤能力，在新鮮的肝癌組織中分選出的少量CD133⁺細(xì)胞(1.3％–13.6％)也表現(xiàn)出了更強(qiáng)的自我更新能力和成瘤能力，這些研究證實(shí)了CD133⁺細(xì)胞是肝癌干細(xì)胞。

本申請(qǐng)的發(fā)明人擬提供CD133干擾核酸的醫(yī)用新用途，具體涉及CD133干擾核酸組作為干細(xì)胞標(biāo)志物在抑制肝癌增殖中的應(yīng)用，及其在制備肝癌的輔助治療藥物或試劑中的用途。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供CD133干擾核酸的醫(yī)用新用途，具體涉及CD133干擾核酸組作為干細(xì)胞標(biāo)志物在抑制肝癌增殖中的應(yīng)用，及其在制備肝癌的輔助治療藥物或試劑中的用途。

本發(fā)明通過(guò)磁珠分選的方法在Huh7和PLC/PRF/5肝癌細(xì)胞中，分選出了CD133⁺的肝癌干細(xì)胞，利用shCD133-1和shCD133-2兩個(gè)針對(duì)CD133不同序列的shRNA，分別敲低了肝癌細(xì)胞系Huh7-CD133⁺細(xì)胞和PLC/PRF/5-CD133⁺細(xì)胞中的CD133的表達(dá)，以不針對(duì)任何人源基因序列的shLacz做對(duì)照，經(jīng)western blot檢測(cè)，觀察到CD133干擾RNA顯著敲低了CD133的表達(dá)，證明了shRNA序列對(duì)CD133蛋白表達(dá)的有效干擾。