[發(fā)明專(zhuān)利]一種雞全血簡(jiǎn)便快速DNA提取方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711265226.4
• 申請(qǐng)日: 2017-12-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107841498B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王樹(shù)艷;沈前程;李軍成;凌丁
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 廣州市紅荔專(zhuān)利代理有限公司 44214
• 代理人: 李彥孚;何承鑫

1.一種雞全血簡(jiǎn)便快速DNA提取方法，包括樣本準(zhǔn)備，樣本裂解，樣本分離DNA沉淀，DNA洗滌和制備DNA，其特征在于，具體制備步驟如下：

（1）樣本準(zhǔn)備：取雞全血，加入抗凝劑，獲得雞抗凝血；

（2）樣本裂解：將雞抗凝血加入裂解液中混合，于56～60℃水溶鍋放置20～30min，所述的雞抗凝血與裂解液質(zhì)量比為1：2.5，得雞裂解血；

（3）樣本分離DNA沉淀：將雞裂解血加入分離液，于70～80℃水溶鍋放置20～30min后，在4000 rpm離心機(jī)中離心分離10～15 min，取上清液轉(zhuǎn)移到另一EP管中，得雞分離血；

（4）DNA洗滌：在雞分離血中加入析出液，于4000 rpm離心機(jī)中離心分離1～2 min，留沉淀，加入洗滌液后混勻，得雞初級(jí)DNA提取液；

（5）制備DNA：將雞初級(jí)DNA提取液于4000 rpm離心機(jī)中離心分離1～2 min；棄上清，收集沉淀室溫干燥，加入TB緩沖液，即得雞DNA提取液；

所述的抗凝劑為枸櫞酸鈉、Na₂EDTA·2H₂O或肝素鈉；所述的枸櫞酸鈉終濃度為0.38%，所述的Na₂EDTA·2H₂O濃度為1.5～2.2 mg/mL，所述的肝素鈉濃度為300~400單位/ml；

所述的裂解液為50mM Na2EDTA·2H2O、2% SDS、0.19M NaCl和蛋白酶 K終濃度0.4μg/μL；

所述的分離液為6M NaCl。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述雞全血簡(jiǎn)便快速DNA提取方法，其特征在于，所述的析出液為90～95%乙醇。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述雞全血簡(jiǎn)便快速DNA提取方法，其特征在于，所述的洗滌液為70%乙醇和0.14 M NaCl。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述雞全血簡(jiǎn)便快速DNA提取方法，其特征在于，所述的TB緩沖液由Tris、Na₂EDTA·2H₂O和硼酸組成，所述的Tris濃度為0.108g/ml, Na₂EDTA·2H₂O濃度為7.44×10^-3 g/ml，硼酸濃度為5.5×10^-2 g/ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述雞全血簡(jiǎn)便快速DNA提取方法，其特征在于，所述的雞DNA提取液在2～8 ℃?zhèn)溆没?20 ℃以下保存。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述雞全血簡(jiǎn)便快速DNA提取方法，其特征在于，具體制備步驟如下：

（1）樣本準(zhǔn)備：取雞全血，加入抗凝劑，獲得雞抗凝血；

（2）樣本裂解：將100μL雞抗凝血加入250μL裂解液中混勻，于56～60℃水溶鍋放置20～30min，得雞裂解血；

（3）樣本分離DNA沉淀：將雞裂解血加入600μL分離液，顛倒3～5次混勻，于70～80℃水溶鍋放置20～30min后，在4000 rpm離心機(jī)中離心分離10～15 min，取200μL上清液轉(zhuǎn)移到另一EP管中，得雞分離血；

（4）DNA洗滌：在雞分離血中加入400μL析出液，于4000 rpm離心機(jī)中離心分離1～2min，留沉淀，加入600μL洗滌液后上下顛倒3~5次混勻，得雞初級(jí)DNA提取液；

（5）制備DNA：將雞初級(jí)DNA提取液于4000 rpm離心機(jī)中離心分離1～2 min；棄上清，收集沉淀室溫干燥，加入200μL TB緩沖液，即得雞DNA提取液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述雞全血簡(jiǎn)便快速DNA提取方法，其特征在于，所述的室溫干燥時(shí)間為5~10min。