[發明專利]一種鴨甲肝病毒抗原抗體復合物疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201711263722.6
• 申請日: 2017-12-05
• 公開（公告）號: CN107982532B
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 郝東敏;鐘洪義;魯愛玲;鄭化鵬;劉詩柱;王善輝
• 申請（專利權）人: 安徽強英鴨業集團有限公司;郝東敏
• 主分類號: A61K39/42
• 分類號: A61K39/42;A61K39/125;A61K47/46;A61P31/14
• 代理公司: 合肥中谷知識產權代理事務所(普通合伙) 34146
• 代理人: 洪玲

本發明公開了一種鴨甲肝病毒抗原抗體復合物疫苗及其制備方法，所述疫苗為3型鴨甲肝病毒抗原與鴨卵黃抗體按照體積比1：50混合反應后的抗原抗體復合物，與現有技術相比，本發明通過在3型鴨甲肝病毒抗原中添加硫酸鎂、氯化鈉和蜂膠，并用該抗原免疫產蛋鴨制備鴨卵黃抗原，最后通過卵黃抗體和3型鴨甲肝病毒抗原進行合理配比，制成3型鴨甲肝病毒抗原抗體復合物疫苗，經過多次試驗表明，該方法制備獲得的抗原抗體復合物結合效率該疫苗注射后2h內起效，無免疫空白期，且效價高，安全性好，保護率高，保護周期長。

技術領域

本發明涉及的是禽用疫苗的技術領域，尤其涉及的是一種鴨甲肝病毒抗原抗體復合物疫苗及其制備方法。

背景技術

鴨甲型病毒性肝炎是由小RNA病毒科的鴨甲型肝炎病毒引起的一種急性、高度致死性傳染病，目前是危害雛鴨的最主要疫病之一。鴨甲型病毒性肝炎分為三個血清型，即：DHAV-1、DHAV-2和DHAV-3。近幾年，3型鴨甲肝病毒在臨床上的分離率接近90％，為目前我國流行的主要血清型。

現有報道證實，鴨甲型病毒性肝炎可在2-39日齡鴨發病，目前該病主要采用疫苗或高免抗體進行預防。疫苗免疫預防存在免疫空白期，對較小日齡發病鴨群無法起到很好的保護，且保護率較低。高免抗體作用時間短，僅能持續7天左右，治療時效果較好，但用其作為免疫預防的一種措施較為不妥。

抗原抗體復合物疫苗又稱免疫復合物疫苗，是20世紀90年代發展起來的一種新型疫苗，由特異性高免血清按照恰當的比例與抗原混合而成，其優點在于安全性高和免疫效果好，可以突破母源抗體干擾，是目前為數不多的，可以在孵化期內接種的安全疫苗，因此在動物疫病防控中備受關注?？乖贵w復合物疫苗中的抗體主要作用是延緩病毒的釋放，即當母源抗體水平降低到一定水平時，復合物中的抗體開始釋放復制并產生免疫保護力，因此比普通疫苗的安全性和免疫效果更好。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供了一種鴨甲肝病毒抗原抗體復合物疫苗的制備方法，以解決現有3型鴨甲型病毒性肝炎疫苗存在免疫空白期、保護周期短等技術問題。

本發明是通過以下技術方案實現的：

本發明提供了一種鴨甲肝病毒抗原抗體復合物疫苗，包括體積比為1：50的3型鴨甲肝病毒抗原與鴨卵黃抗體組成的抗原抗體復合物。

進一步地，所述3型鴨甲肝病毒抗原中含有0.4-0.5％質量比硫酸鎂、0.1-0.25％質量比氯化鈉和0.2-0.5％質量比蜂膠，效價范圍為10^6.0ELD₅₀/0.2ml-10^7.0ELD₅₀/0.2ml，所述鴨卵黃抗體為經所述3型鴨甲肝病毒抗原免疫后的高免鴨蛋中提取獲得的。

本發明還提供了一種鴨甲肝病毒抗原抗體復合物疫苗的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備3型鴨甲肝病毒抗原

利用3型鴨甲肝病毒免疫尿囊接種鴨胚，置于37℃下孵育，收集接種后24-96小時內死亡的鴨胚，置于-20℃冷凍處理0.5-1h，分別收取尿囊液和胚體；將胚體去掉頭和四肢后，進行充分勻漿，離心取上清與尿囊液混合，經0.22微米濾膜進行過濾后，加入0.4-0.5％質量比硫酸鎂、0.1-0.25％質量比氯化鈉和0.2-0.5％質量比蜂膠，混勻，獲得3型鴨甲肝病毒抗原；

(2)制備卵黃抗體

將步驟(1)制備的抗原滅活后免疫產蛋鴨，收集抗體效價為1：64以上的高免鴨蛋，在無菌條件下，取蛋黃與生理鹽水按照1：5體積比混合，攪勻過濾后，向濾液中依次加入40％體積比的甲醛溶液、青霉素溶液、鏈霉素溶液，使其終體積濃度分別為0.1％(v/v)、2000-3000IU/mL、2000-3000IU/mL，混勻，置于37℃下反應1h，獲得卵黃抗體；

(3)制備疫苗