[發明專利]一種檢測肉牛PLAG1基因Indel標記的方法及其專用試劑盒

有效

• 申請號: 201711262485.1
• 申請日: 2017-12-04
• 公開（公告）號: CN107988385B
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發明（設計）人: 黃永震;徐微;鄭立;賀花;張桂民;陳宏;雷初朝;黨瑞華;藍賢勇;胡沈榮
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

1.一種檢測郟縣紅牛PLAG1基因Indel標記的方法，其特征在于：包括以下步驟：

以郟縣紅牛的基因組DNA為模板，以引物對P1為引物，PCR擴增獲得包含插入/缺失位點的郟縣紅牛PLAG1基因部分片段，然后進行瓊脂糖凝膠電泳，根據瓊脂糖凝膠電泳結果將不同肉牛個體分為缺失型、正常型或雜合型；

所述的引物對P1為：

上游引物F1：5'-TCCGAACAACAGGTGAGGGAGAAAT-3'

下游引物R1：5'-CCACTTCAGGGGTGCTCTAGGTTTG-3'；

所述的正常型在瓊脂糖凝膠電泳結果中表現為142bp的一條條帶；雜合型表現為142bp和123bp的兩條條帶；缺失型表現為123bp的一條條帶；

在郟縣紅牛中，正常型或雜合型的個體比缺失型個體在生長性狀上更優。

2.根據權利要求1所述一種檢測郟縣紅牛PLAG1基因Indel標記的方法，其特征在于：所述的插入/缺失位點位于牛PLAG1基因參考序列AC 000171.1的25020872-25020890位。

3.根據權利要求1所述一種檢測郟縣紅牛PLAG1基因Indel標記的方法，其特征在于：所述的PCR擴增采用的反應體系包括10ng/μL模板DNA 1μL及10μmol/L的引物對P1所對應的上、下游引物各0.5μL。

4.根據權利要求1所述一種檢測郟縣紅牛PLAG1基因Indel標記的方法，其特征在于：所述的PCR擴增采用的反應程序為：1)95℃預變性5min；2)95℃變性30s，63℃退火30s，72℃延伸20s，共35個循環；3)72℃延伸10min。

5.根據權利要求1所述一種檢測郟縣紅牛PLAG1基因Indel標記的方法，其特征在于：所述的瓊脂糖凝膠的質量濃度為3％。

6.如權利要求1所述的檢測郟縣紅牛PLAG1基因Indel標記的方法在肉牛分子標記輔助選擇育種中的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于：在郟縣紅牛中，正常型或雜合型的個體比缺失型個體在生長性狀上更優。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：所述的生長性狀為尻長、腰角寬、胸深、坐骨端寬、胸圍或薦高。

9.一種檢測郟縣紅牛PLAG1基因Indel標記的試劑盒，其特征在于：包括用于PCR擴增肉牛插入/缺失位點的引物對P1，所述的引物對P1為：

上游引物F1：5'-TCCGAACAACAGGTGAGGGAGAAAT-3'

下游引物R1：5'-CCACTTCAGGGGTGCTCTAGGTTTG-3'。