[發明專利]一種人羊膜神經管的制備方法及應用

在審

• 申請號: 201711261777.3
• 申請日: 2017-12-04
• 公開（公告）號: CN107952113A
• 公開（公告）日: 2018-04-24
• 發明（設計）人: 余麗梅;王鈺瑩;范振海
• 申請（專利權）人: 遵義醫學院
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/00;A61L27/50
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙)50217
• 代理人: 黃書凱

技術領域

本發明涉及生物技術與醫學領域，具體涉及一種人羊膜神經管的制備方法及應用。

背景技術

臨床常見的周圍神經損傷多為創傷所致，可單獨發生，或與其他組織損傷合并發生，也可由于壓迫、感染、缺血、腫瘤或營養障礙等引起。周圍神經損傷后，受該神經支配區的運動，感覺和營養均將發生障礙。臨床上表現為疼痛、肌肉癱瘓，皮膚粗糙、無汗、萎縮、破潰，感覺減退或消失，血運障礙等。故而需要及時恢復神經連續性和完整性，并保證神經和髓鞘在適宜的微環境下再生，才能使損傷的神經得以修復，保障受損神經支配區域功能的康復，減輕神經支配區的肌肉萎縮和感覺障礙。

近年來，越來越多的研究運用組織工程技術制備多種神經管，橋接神經斷端，建立神經再生通道，明顯促進了神經損傷的再生與修復；給予神經營養因子，促進軸突再生，施萬氏細胞增殖；損傷神經周圍包裹生物材料，防止粘連；移植間充質干細胞，抗炎、改善神經再生微環境與血供等，在周圍神經損傷的修復中都產生了較好的修復作用，展示了良好的生物技術臨床應用前景。然而，如何構建更加仿真的神經管或具有多種生物活性的神經管，使用生物特性更優的生物材料或賦予生物材料新的活性等，一直是周圍神經損傷修復學領域積極探索的重要研究課題。所需生物材料生物相容性、降解情況、可塑性和賦予的生物學功能及合理使用等，都決定著神經再生、修復的質量。常用的生物材料有殼聚糖、聚乳酸和聚羥基乙酸共聚物復合膜、幾丁糖-膠原-二丙酸、纖維蛋白凝膠等，這些生物材料均具有良好的生物相容性，能防止神經粘連，并為神經提供了相對較好的再生微環境。

人羊膜(human amniotic membrane，HAM)作為一種生物材料已有悠久的歷史，近30年來，才逐漸成為關注與研究的重點，目前已較為廣泛地應用于眼表損傷、角膜重建、陰道修補、皮膚燒傷、組織填充、支架材料及神經管制作等。研究表明羊膜具有非致瘤性和低免疫原性，其抗菌、抗病毒、抗炎作用與分泌多種活性因子等功能特性，如分泌轉化生長因子-β、表皮生長因子、基質細胞衍生因子、血管內皮細胞生長因子、多型膠原等，使其成為了醫用生物材料開發的良好來源；作為廢棄物，使用中存在的倫理爭議非常小，來源十分豐富，也促成了羊膜產品的研發。近年多篇文獻報道，鑒于羊膜的分泌功能等，將新鮮或凍干的羊膜作為周圍神經修復的材料可明顯促進損傷神經功能的恢復，但其具體修復神經作用報道不盡一致，修復的作用機制更是了解甚少。

發明內容

本發明意在提供一種利用新鮮的人羊膜制作的神經管，以促進損傷神經功能的恢復，并進一步研究其修復的作用機制。

本發明的一種人羊膜神經管的制備方法，取2～4層新鮮的人羊膜片，邊緣用臨床體內應用的粘合劑粘合封閉制成人羊膜神經管。

進一步，所述粘合劑為醫用OB膠或醫用組織膠水。醫用OB膠為外科封堵瘺口用的氰基烯酸酯膠，醫用組織膠水為外科傷口閉合、止血所用的α-氰基丙烯酸正丁酯。

進一步的，所述新鮮的人羊膜片為無菌獲取的胎兒娩出后、去除表面粘液及血漬的胎盤附屬物后獲得。

進一步的，所述人羊膜片為3層。

本發明的工作原理及有益效果在于：(1)應用市售醫用OB膠或醫用組織膠水粘合新鮮羊膜片，可靈活調整制備神經管的大小；(2)利用HAM分泌多種活性物質，發揮抗炎作用等生物學功能，為神經再生提供合適的微環境，HAM也可能為施萬氏細胞增生，形成施萬氏管提供生物材料支架，從而促進了軸突的再生；(3)活性HAM的應用，可能減輕神經元變性，較快地恢復神經的連續性，恢復了神經功能和逆向軸漿運輸，改善了神經損傷及Wallerian變性所導致的多種神經再生與再生抑制因子的分子變化。總之，本發明的效果驗證實驗中，不但很好地證明了這種HAM神經管良好的促周圍神經損傷修復作用，還明確了可能涉及的多種作用機制，為HAM神經管的進一步開發利用奠定了關鍵技術基礎和重要的實驗研究證據。

人羊膜神經管在修復周圍神經腓總神經損傷的應用。具體為將長2.0～4.0cm×寬1.0～2.0cm大小的人羊膜片環繞包裹于縫合的腓總神經斷端周圍，神經管側面、人羊膜片邊緣用醫用OB膠或醫用組織膠水封閉。人羊膜神經管包裹與腓總神經斷端縫合處，14和28天檢測大鼠趾展指數提高，腓總神經斷端縫合處上下端神經傳導速度，脛骨前肌肌肉恢復率和組織病理學變化、軸突運輸明顯改善，腓總神經損傷恢復良好。