[發明專利]檢測CRLF2基因的方法和引物

在審

• 申請號: 201711261750.4
• 申請日: 2017-12-04
• 公開（公告）號: CN108004321A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發明（設計）人: 牛林梅;吳鵬飛;王淑一
• 申請（專利權）人: 福州艾迪康醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黃素萍

本發明公開了一種檢測與急性淋巴細胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia,ALL)有關的細胞因子受體樣因子2(cytokine receptor?like factor 2，CRLF2)基因突變的引物和方法，其包括擴增檢測全外顯子序列的8對引物；采用Sanger測序技術和測序引物。本發明可快速地將CRLF2基因全外顯子及相關的突變檢測出來。利用本發明完成的檢測結果準確，可以預測ALL患者的預后并為治療提供依據。

技術領域

本發明屬生命科學和生物技術領域，特別涉及檢測與急性淋巴細胞白血病有關的CRLF2基因突變的引物和方法。

背景技術

急性淋巴細胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)是由于原始及幼稚淋巴細胞在造血組織異常增殖并浸潤全身各組織臟器的一種造血系統惡性克隆性疾病。ALL的發病率高，且治療緩解率低，復發率及死亡率高，是嚴重威脅患者生命健康的惡性腫瘤。研究發現細胞遺傳學改變在ALL的發病中起重要作用，60％-85％的ALL具有克隆性染色體異常，其中66％為特異性染色體重排。越來越多的資料表明，細胞遺傳學改變可以作為ALL獨立的一個預后指標。近年來，文獻報道細胞因子受體樣因子2(cytokine receptor-like factor 2，CRLF2)基因高表達與ALL高危復發及不良預后密切相關。

CRLF2基因定位于染色體Xp22.3/Yp11.3假常染色體區l(PAR1)，編碼細胞因子受體樣因子2，又名胸腺間質淋巴細胞受體(thymic stromal lymphopoietin receptor，TSLPR)。CRLF2與IL-7受體α(CDl27)相互作用，形成胸腺間質淋巴細胞生成因子(thymicstromal lymphopoietin，TSLP)的異二聚體受體，介導高親和力的TSLP結合和信號。TSLP/CRLF2信號在T細胞和樹突狀細胞的發育、炎癥反應及過敏反應中有重要作用，并刺激B細胞增殖。CRLF2發生基因重拍或基因突變都可導致ALL細胞表面CRLF2過表達，影響其功能及下游JAK-STAT信號通路。研究報道發現在7％的兒童和15％的成人B-ALL中存在CRLF2基因的過表達，而CRLF2基因過表達與ALL的不良預后相關。有學者進行裸鼠實驗發現西羅莫司可終止部分TSLP介導的細胞增殖，西羅莫司作為一種mTOR蛋白特異性抑制劑，與細胞內受體FKBP-12結合形成復合物后直接作用于mTOR中的FRB(FKBP-12.rapamycin binding)結構域從而抑制蛋白活性，在mTOR途徑中發揮了重要作用，提示分析CRLF2的基因異常可能作為患者治療方案的選擇依據。

綜上所述，CRLF2基因異常可通過影響基因表達及下游JAK-STAT信號通路影響ALL的發病及預后，同時監測CRLF2基因異常可能作為個體化治療的選擇依據。因此，本研究通過Sanger測序法檢測CRLF2的全外顯子序列，分析CRLF2的基因突變情況，用于預測ALL的預后。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測CRLF2基因突變的引物，采用PCR技術，可用于快速檢測急性淋巴細胞白血病患者體內CRLF2基因多態位點的突變情況。所述檢測CRLF2基因多態熱點突變情況的引物，包括：

擴增CRLF2基因的引物，其堿基序列為：

CRLF2-Exon1-F:TGTAAAACGACGGCCAGTGTGCTTCCTGCCTGTAATCATT

CRLF2-Exon1-R:AACAGCTATGACCATGGAAAGAAACCTCCATGCTCATTG

CRLF2-Exon2-F:TGTAAAACGACGGCCAGTCCGTGAACTTCATGCGTCTC

CRLF2-Exon2-R:AACAGCTATGACCATGCGGCTTGCACAGTCTGATG