[發(fā)明專利]一種南極磷蝦β-蛻皮激素的提取及高效液相檢測(cè)方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201711261610.7 | 申請(qǐng)日： | 2017-12-04 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN107727776B | 公開(kāi)（公告）日： | 2020-09-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 韓香凝;劉代成 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 山東師范大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | G01N30/06 | 分類號(hào)： | G01N30/06;G01N30/14;G01N30/88 |
| 代理公司： | 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221 | 代理人： | 王志坤 |
| 地址： | 250014 *** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 南極 磷蝦 蛻皮激素 提取 高效 檢測(cè) 方法 | ||
1.一種南極磷蝦β-蛻皮激素的提取方法，其特征在于，步驟如下：
(1)取冷凍南極磷蝦解凍，并將其進(jìn)行組織剪碎處理；
(2)取剪碎的南極磷蝦和甲醇混合進(jìn)行超聲提取，過(guò)濾提取液，收集濾液；
(3)將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到β-蛻皮激素的粗提物；
(4)將粗提物用甲醇完全溶解，加入等體積的正己烷，混勻，離心，棄去上清；
(5)將步驟(4)離心后的下層液體進(jìn)行冷凍處理，析出白色沉淀后，吸取上清，棄去沉淀，將上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后有機(jī)濾膜過(guò)濾，獲得南極磷蝦β-蛻皮激素提取物；
所述步驟(2)中取剪碎的南極磷蝦和甲醇以W/V為1g：5-8ml的比例混合進(jìn)行超聲提取；
所述步驟(3)中將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)至干，旋蒸溫度為45-55℃，得到β-蛻皮激素的粗提物；
所述步驟(4)中，將粗提物用甲醇完全溶解，加入等體積的正己烷，超聲混勻，2800-3200rpm，4℃條件下離心25-35min，棄去上清，重復(fù)三次；
所述步驟(5)中，將下層液體放入-20℃冰箱，析出白色沉淀后，吸取上清，棄去沉淀，將上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至一定體積，用0.22μm的有機(jī)濾膜過(guò)濾，作為樣品液備用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種南極磷蝦β-蛻皮激素的提取方法，其特征在于，經(jīng)冷凍處理的南極磷蝦冷凍處理的溫度為-45℃～-80℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種南極磷蝦β-蛻皮激素的提取方法，其特征在于，步驟(1)為：取冷凍南極磷蝦，在5％生理鹽水中解凍，解凍時(shí)間2-4h，將解凍處理的南極磷蝦吸干水分，并將其進(jìn)行組織剪碎處理。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種南極磷蝦β-蛻皮激素的提取方法，其特征在于，步驟(2)中超聲提取的條件為:30℃-38℃、250-350W、30-50kHz的條件下超聲提取1-2h。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種南極磷蝦β-蛻皮激素的提取方法，其特征在于，超聲提取的條件為：35℃、300W、40kHz的條件下超聲提取1h。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種南極磷蝦β-蛻皮激素的提取方法，其特征在于，步驟(3)中將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)至干，旋蒸溫度為50℃。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種南極磷蝦β-蛻皮激素的提取方法，其特征在于，步驟(4)中超聲混勻條件為，25-35℃，250-350w，40kHz。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種南極磷蝦β-蛻皮激素的提取方法，其特征在于，超聲混勻條件為35℃，300w，40kHz。
9.一種南極磷蝦中β-蛻皮激素的檢測(cè)方法，其特征在于，
采用權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)提取方法中步驟(1)-(5)提取南極磷蝦β-蛻皮激素；此外還包括如下步驟：
(6)以步驟(5)獲得的南極磷蝦β-蛻皮激素提取物作為樣品液，稱取β-蛻皮激素標(biāo)準(zhǔn)品溶于甲醇制備標(biāo)準(zhǔn)品液；
(7)采用高效液相色譜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品液和樣品液，高效液相色譜的檢測(cè)條件為：紫外/可見(jiàn)光檢測(cè)器，YMC-PACK ODS-A 250×4.6mml.D.S-5μm.12nm色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-水，檢測(cè)波長(zhǎng)248nm；
(8)通過(guò)軟件進(jìn)行高效液相峰面積定量，得到樣品中β-蛻皮激素的濃度。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測(cè)方法，其特征在于，高效液相色譜的檢測(cè)條件為：Waters1525 BianaryHPLC泵，Waters 2489 UV/Visible檢測(cè)器。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(6)中，精密稱取1.0000mgβ-蛻皮激素標(biāo)準(zhǔn)品溶于1.0ml甲醇，得濃度為1.0mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)液。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(7)中，流動(dòng)相為甲醇：水＝40:60，流速：1ml/min，等度洗脫。
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