[發(fā)明專利]一種移栽成活率高的富硒鐵皮石斛苗培育方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711259058.8
• 申請日: 2017-12-04
• 公開（公告）號: CN107926703A
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳慧斌;吳中中;黃芳芳;吳騁;李軍
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江東來天然生物制品有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11562
• 代理人: 宋平

1.一種移栽成活率高的富硒鐵皮石斛苗培育方法，其特征在于，步驟如下：

1）取鐵皮石斛莖段，在90%的酒精中浸泡1-2min，取出，用無菌水沖洗2-3次，然后放入0.1%的氯化汞溶液中浸泡5-8min，再用無菌水沖洗4-5次，獲得無菌鐵皮石斛莖段；

2）將無菌鐵皮石斛莖段沿橫截面切成薄片，獲得組織薄片；

3）將組織薄片放入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在22-25℃、無光照的條件下進行原球莖的萌發(fā)，獲得原球莖；

4）將原球莖接種于增殖培養(yǎng)基中，在24-26℃、光照6h/d、光照強度200-300lux的條件下進行原球莖的增殖，獲得增殖原球莖；

5）將增殖原球莖接種于生根培養(yǎng)基中，在25-28℃、光照10h/d、光照強度600-700lux的條件下進行生根培養(yǎng)，獲得高度為2.0-2.5cm并長出2-3片真葉的組培苗；

6）將組培苗接種至幼苗培養(yǎng)基中，在25-30℃、光照15h/d、光照強度1700-1800lux的條件下進行培養(yǎng)，獲得高度為3.5-4.0cm的幼苗；

7）將幼苗轉(zhuǎn)接至成苗培養(yǎng)基中，在25-30℃、光照15h/d、光照強度2800-3000lux的條件下進行培養(yǎng)，獲得高度為6-7cm、根長為1-2cm的成苗。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的移栽成活率高的富硒鐵皮石斛苗培育方法，其特征在于，步驟2）中，所述組織薄片的厚度為1-2mm。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的移栽成活率高的富硒鐵皮石斛苗培育方法，其特征在于，步驟3）中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為采用1/2MS培養(yǎng)基并加入5g/L蛋白胨、8g/L甘草提取液、0.4mg/L的亞硒酸鈉，混合均勻后，于110℃滅菌處理20min，即可。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的移栽成活率高的富硒鐵皮石斛苗培育方法，其特征在于，步驟4）中，所述增殖培養(yǎng)基為采用1/2MS培養(yǎng)基并加入10g/L土豆汁、10g/L瓊脂、5g/L赤芍提取液、8mg/L 6-芐氨基嘌呤、0.5mg/L的亞硒酸鈉，混合均勻后，于110℃滅菌處理20min，即可。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的移栽成活率高的富硒鐵皮石斛苗培育方法，其特征在于，步驟5）中，所述生根培養(yǎng)基為采用MS培養(yǎng)基并加入15g/L香蕉汁、0.5g/L萘乙酸、3g/L山大顏提取液、0.5mg/L的亞硒酸鈉，混合均勻后，于110℃滅菌處理20min，即可。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的移栽成活率高的富硒鐵皮石斛苗培育方法，其特征在于，步驟6）中，所述幼苗培養(yǎng)基為采用MS培養(yǎng)基并加入20g/L香蕉汁、10mg/L 6-芐氨基嘌呤、5g/L甘草提取液、0.8mg/L的亞硒酸鈉，混合均勻后，于110℃滅菌處理20min，即可。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的移栽成活率高的富硒鐵皮石斛苗培育方法，其特征在于，步驟7）中，所述成苗培養(yǎng)基為采用MS培養(yǎng)基并加入20g/L香蕉汁、10mg/L 6-芐氨基嘌呤、0.5mg/L多效唑、1mg/L的亞硒酸鈉，混合均勻后，于110℃滅菌處理20min，即可。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的移栽成活率高的富硒鐵皮石斛苗培育方法，其特征在于，所述甘草提取液的制備方法如下：將甘草粉碎后，加入15-20倍重量的水，浸泡2h，煎煮2h，過濾，獲得第一煎煮液和第一煎煮渣，將第一煎煮渣再次加入10-12倍重量的水，浸泡1h，煎煮1h，過濾，獲得第二煎煮液和第二煎煮渣，將第一煎煮液和第二煎煮液合并，蒸發(fā)濃縮為60℃下相對密度為1.10的濃縮液，即可獲得甘草提取液。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的移栽成活率高的富硒鐵皮石斛苗培育方法，其特征在于，所述赤芍提取液和山大顏提取液的制備方法均與甘草提取液的制備方法相同。