[發明專利]一種微藻類胡蘿卜素成分的含量測定方法

在審

• 申請號: 201711258423.3
• 申請日: 2017-11-29
• 公開（公告）號: CN109839453A
• 公開（公告）日: 2019-06-04
• 發明（設計）人: 梁鑫淼;金高娃;郭志謀;閆競宇
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發明涉及一種微藻類胡蘿卜素成分的含量測定方法，即采用基質分散固相萃取前處理、高效液相色譜法在同一色譜條件下對微藻中3種分別為游離的巖藻黃素、蝦青素、葉黃素的類胡蘿卜素成分同時進行含量測定。本發明包括如下步驟：1)稱取0.1?5g反相固相萃取填料及與填料質量比為1:2?1:20的微藻粉末于瑪瑙或玻璃研砵中，研磨；2)將研磨均勻的混合物裝入帶有聚四氟墊片的空SPE管中，用體積比100％～70％的水?甲醇淋洗，有機溶劑洗脫；3)洗脫液濃縮定容后采用高效液相色譜分析。該方法具有簡單快速、試劑用量少、結果準確可靠、穩定性好等特點，適用于微藻中游離類胡蘿卜素成分的定性、定量分析。

技術領域

本發明涉及一種微藻中類胡蘿卜素成分的含量測定方法。其特征在于：采用基質分散固相萃取前處理、高效液相色譜法在同一色譜條件下對微藻中3種分別為游離的巖藻黃素、蝦青素、葉黃素的類胡蘿卜素成分同時進行含量測定。該方法具有簡單快速、試劑用量少、結果準確可靠、穩定性好等特點，適用于微藻中游離類胡蘿卜素成分的定性、定量分析。

技術背景

類胡蘿卜素是一類天然存在的脂溶性色素，普遍存在于藻類、植物、真菌和細菌中，它不僅是一種很好的食品添加劑，而且廣泛應用于化妝品、保健品等。人和動物不能合成類胡蘿卜素，均需通過食物獲取。類胡蘿卜素對人體具有多種生物學功能，可對一些疾病起到預防和治療作用，可以降低罹患許多慢性病的風險(李兵等，分析測試學報，2015，第34卷，第7期，813-818)。近年來，人工合成類胡蘿卜素的生物學效應和安全性備受質疑，微藻作為天然類胡蘿卜素的最佳來源受到人們廣泛的關注(許穎穎等，食品工業科技，2016，第37卷，第3期，373-379)。

海洋微藻作為海洋的初級生產者和海洋生物種屬的主體，在海洋生態系統的物質循環和能量流動中起著重要作用。微藻為單細胞光合生物，可通過光合作用捕獲空氣中的CO2，大部分轉化成各類含碳的功能分子單元，包括糖、蛋白、氨基酸、脂質等(W.Gross.Valuable products from biotechnology of microalgae.Microbialbiotechnology,2004,635～648；姚領。碩士學位論文，天津商業大學，海洋微藻抗菌活性藻株篩選及其活性物質分離純化研究。2007，第1頁)。其中脂類化合物可以占到生物量總碳的5～20％(孫書勤。碩士學位論文，中國海洋大學，海洋微藻中脂類生物標記物在天然海水中降解行為的研究。2009，第2頁)，相比連接有氮、氧等雜原子的蛋白質、糖類等分子，是連續碳原子數最多的“高級單體分子”。而微藻獨特的生存環境和原始地位也賦予其多種新穎獨特的具有生物活性的脂質代謝產物。其中從微藻中提取類胡蘿卜素具有明顯的優勢：如，微藻生長迅速，易培養，適于大規模養殖；微藻代謝合成的類胡蘿卜素種類很多，如β-胡蘿卜素、葉黃素、蝦青素等，這些類胡蘿卜素的生物活性和抗氧化性已被證實。因此，研究開發微藻中的類胡蘿卜素，既可擴大天然類胡蘿卜素來源，又可提高藻種的利用價值。

目前，類胡蘿卜素多采用有機溶劑提取，這種方法所用溶劑量較大、花費時間較長。超臨界流體萃取、甲素溶劑萃取、逆流色譜等手段也逐漸應用到類胡蘿卜素的提取中，但這些方法對儀器依賴較大，成本較高。基質分散固相萃取法(MSPD)集研磨、提取、凈化于一體，本發明采用該方法，結合高效液相色譜分析，可以高效率的分離分析微藻中的類胡蘿卜素類化合物。

發明內容

本發明涉及一種微藻類胡蘿卜素成分的含量測定方法。其特征在于：采用基質分散固相萃取前處理、高效液相色譜法在同一色譜條件下對微藻中3種分別為游離的巖藻黃素、蝦青素、葉黃素的類胡蘿卜素成分同時進行含量測定。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

1)稱取0.1-5g反相固相萃取填料及與填料質量比為1:2-1:20的微藻粉末于瑪瑙或玻璃研砵中，充分研磨；

2)將研磨均勻的混合物裝入帶有聚四氟墊片的空SPE管中，用體積比100％～70％的水-甲醇淋洗，有機溶劑洗脫；