[發明專利]一種海水養殖魚多聯抗獨特型卵黃抗體疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201711257613.3
• 申請日: 2017-12-04
• 公開（公告）號: CN108003240B
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 黃威權;趙鋒;李丹
• 申請（專利權）人: 西安德軒馳生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/42
• 分類號: C07K16/42;C07K16/02;A61K39/395;A61P31/04
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種海水養殖魚多聯抗獨特型卵黃抗體疫苗的制備方法，包括以下步驟：

1)、將海水養殖魚致病菌半數致死量濃度的菌液，滅活后加入佐劑免疫小鼠與家兔，小鼠每次免疫的滅活菌量為0.25×10⁴～0.25×10⁵，家兔免疫的滅活菌量為0.5×10⁴～0.5×10⁵，使免疫小鼠或家兔的血清抗體效價達到10^-4；

2)、分別收集小鼠與家兔的血清，使用6種兔抗病原血清混合后加入佐劑免疫產蛋雞，產蛋雞的免疫方法為肌肉注射，免疫量0.5ml，抗體含量為10～50μg；每隔7～10天免疫1次，共免疫3次；

3)、篩選產蛋雞，使用間接ELISA法檢測高免雞所產雞蛋，是否含有六種病原菌的抗獨特型卵黃抗體及效價；

4)收集產蛋雞的雞蛋、分離卵黃、破碎去除雜蛋白，沉淀分層取上清，進一步去除脂蛋白與脂肪后獲得抗獨特型卵黃抗體粗品；

5)純化抗獨特型卵黃抗體粗品即得海水魚病多聯抗獨特型卵黃抗體疫苗；

所述海水養殖魚致病菌為溶藻弧菌編號為ATCC 33838，鰻弧菌編號為ATCC 19106，遲緩愛德華菌編號為ATCC 23657，副溶血弧菌編號為ATCC 7802T，創傷弧菌編號為ATCC33147，鏈球菌編號為MCCC1A10884。

2.根據權利要求1所述的海水養殖魚多聯抗獨特型卵黃抗體疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟1)中免疫小鼠與家兔的方法為腹腔注射或皮下注射，免疫次數為免疫3～4次，每次間隔7～10天。

3.根據權利要求1所述的海水養殖魚多聯抗獨特型卵黃抗體疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟3)產蛋雞篩選的方法為ELISA法檢測高免雞產的蛋含有6種病原菌的抗獨特型抗體，且效價均在10^-4以上。

4.根據權利要求1所述的海水養殖魚多聯抗獨特型卵黃抗體疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟4)中所述破碎方法為：用高壓均質機進行卵黃組織破碎，破碎后加蒸餾水攪拌均勻。

5.根據權利要求1所述的海水養殖魚多聯抗獨特型卵黃抗體疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟4)中雜蛋白去除方法為將卵黃溶液的pH值調至脂蛋白的等電點，沉淀靜置取上清，底部渾濁部分放入離心取上清，合并上清后微孔過濾進一步去除脂蛋白和脂肪，取濾液，該濾液為抗獨特型卵黃抗體粗制品。

6.根據權利要求1所述的海水養殖魚多聯抗獨特型卵黃抗體疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟5)中抗獨特型抗體粗品的純化方法為有機溶劑沉淀離心，取沉淀物；反復處理1～2次取沉淀，干燥或加適量蒸餾水使其沉淀物溶解，即得精制海水魚病多聯抗獨特型卵黃抗體疫苗。

7.根據權利要求1～6任意一項所述的海水養殖魚多聯抗獨特型卵黃抗體疫苗的制備方法獲得的海水魚病多聯抗獨特型卵黃抗體或海水魚病多聯抗獨特型卵黃抗體疫苗。