[發(fā)明專利]一種土壤消毒劑的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711257114.4
• 申請(qǐng)日: 2017-12-04
• 公開（公告）號(hào): CN108164322A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱東洋;喬舍;程依
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 朱東洋
• 主分類號(hào): C05G3/00
• 分類號(hào): C05G3/00;A01N65/42;A01N63/02;A01N25/10;A01P1/00;A01P3/00
• 代理公司: 北京風(fēng)雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 馬驍

1.一種土壤消毒劑的制備方法，其特征在于，該制備方法包括如下步驟：

（1）將蒼蠅放入溫度為0~4℃的水中進(jìn)行研磨，加入水質(zhì)量0.01~0.02%的芐磺酰氟，研磨25~30min，得研磨液，將研磨液、磷酸緩沖液進(jìn)行混合，在溫度0~4℃下靜置25~30min，并進(jìn)行離心25~30min，得上清液，將上清液進(jìn)行加熱，溫度至90~98℃，時(shí)間3~4min，再進(jìn)行離心25~30min，取上清液，將上清液移入羧甲基纖維素層析柱進(jìn)行陽離子交換層析，再用磷酸緩沖液、氯化鈉溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；

（2）按重量份數(shù)計(jì)，取3~4份君子蘭葉、3~4份虎皮蘭葉、1~2份石菖蒲進(jìn)行混合，晾干，再放入粉碎機(jī)中粉碎，過篩，得過篩物，將海藻酸鈉、水進(jìn)行混合，并進(jìn)行攪拌，再加入海藻酸鈉質(zhì)量10~15%的過篩物，進(jìn)行攪拌，得攪拌混合物，將攪拌混合物在溫度50~60℃下烘干，粉碎，過篩，得過篩物a，將洗脫液、過篩物a進(jìn)行混合，并進(jìn)行攪拌20~30min，得混合液，備用；

（3）將花圃中土樣、無菌水進(jìn)行混合，在溫度30~40℃下振蕩培養(yǎng)25~30 min，靜置1~2h，取上清液，向上清液中加入50~60%的水稀釋，在溫度70~80℃水浴10~15min，得稀釋液，將稀釋液用接種環(huán)接種至固體培養(yǎng)基中，在溫度20~30℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2d，挑取固體培養(yǎng)基的菌落，并接種至牛肉膏蛋白胨平板上劃線分離純化，挑選菌徑最大的菌落，將菌徑最大的菌落、液體培養(yǎng)基進(jìn)行混合，在溫度25~30℃，120~160r/min搖床培養(yǎng)15~18h，得培養(yǎng)液；

將活性污泥、糖蜜、水進(jìn)行混合，高溫滅菌，加入培養(yǎng)液，在溫度25~30℃，160~180r/min條件下發(fā)酵1~2d，再加入草炭，混合均勻后，在溫度40~50℃下干燥，并進(jìn)行粉碎，得粉碎物，將步驟（2）備用的混合液、粉碎物進(jìn)行混合，并進(jìn)行攪拌10~15min，即得土壤消毒劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述土壤消毒劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中蒼蠅、溫度為0~4℃的水的質(zhì)量比1：5~6，研磨液、磷酸緩沖液的質(zhì)量比1：4~5。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述土壤消毒劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中磷酸緩沖液是按質(zhì)量比1：2：5~6，將磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、水進(jìn)行混合，即得磷酸緩沖液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述土壤消毒劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中殼聚糖、溫度為80~90℃的水的質(zhì)量比1：3~4，洗脫液、過篩物a的質(zhì)量比10~15：1~2。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述土壤消毒劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中花圃中土樣、無菌水的質(zhì)量比1：10~15，菌徑最大的菌落、液體培養(yǎng)基的質(zhì)量比1：5~6。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述土壤消毒劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中固體培養(yǎng)基是按重量份數(shù)計(jì)，取40~50份水、10~15份瓊脂、10~15份甘露醇、5~7份碳酸鈣、0.2~0.4份磷酸二氫鉀、0.2~0.4份硫酸鎂、0.2~0.4份氯化鈉、0.1~0.2份硫酸鈣進(jìn)行混合，高溫滅菌，即得固體培養(yǎng)基。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述土壤消毒劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中牛肉膏蛋白胨平板是按重量份數(shù)計(jì)，取50~60份水、15~25份瓊脂、10~15份蛋白胨、5~7份氯化鈉、3~4份牛肉膏進(jìn)行混合，高溫滅菌，即得牛肉膏蛋白胨平板。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述土壤消毒劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中液體培養(yǎng)基是按重量份數(shù)計(jì)，取40~50份水、10~15份甘露醇、5~7份碳酸鈣、0.2~0.4份磷酸二氫鉀、0.2~0.4份硫酸鎂、0.2~0.4份氯化鈉、0.1~0.2份硫酸鈣進(jìn)行混合，高溫滅菌，即得液體培養(yǎng)基。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述土壤消毒劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（4）中按重量份數(shù)計(jì)，取40~50份水、40~50份活性污泥、10~15份糖蜜、5~6份培養(yǎng)液、3~4份草炭，步驟（2）備用的混合液、粉碎物的質(zhì)量比30~40：5~6。