[發明專利]葡萄糖氧化酶-DNAzyme復合水凝膠及其在葡萄糖檢測中的應用

在審

• 申請號: 201711256475.7
• 申請日: 2017-12-04
• 公開（公告）號: CN109868304A
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 劉明哲;翁金鵬
• 申請（專利權）人: 沈陽藥科大學
• 主分類號: C12Q1/54
• 分類號: C12Q1/54;C12Q1/28;C12Q1/26;G01N21/78
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207
• 代理人: 靳玲

1.葡萄糖氧化酶-DNAzyme復合水凝膠，其特征在于，所述的復合水凝膠為葡萄糖氧化酶和DNAzyme復合的水凝膠，其水凝膠骨架結構為：

m與n的比為2000:1至10:1，優選800:1至100:1。

2.如權利要求1所述的葡萄糖氧化酶-DNAzyme復合水凝膠，其特征在于，所述的復合水凝膠是以5’端連有甲基丙烯酰胺的具有過氧化酶活性的DNAzyme和丙烯酰胺作為聚合單體，以甲叉雙丙烯酰胺作為交聯劑，在自由基聚合的過程中將葡萄糖氧化酶包埋在水凝膠中得到。

3.如權利要求1或2所述的葡萄糖氧化酶-DNAzyme復合水凝膠，其特征在于，DNAzyme為具有過氧化酶活性的DNA，水凝膠中丙烯酰胺單體的質量百分比為4％～20％。

4.如權利要求1所述的葡萄糖氧化酶-DNAzyme復合水凝膠的制備方法，其特征在于，

(1)DNAzyme的制備：利用DNA合成儀將3-氰乙基-二異丙基-6-甲基丙烯酰胺基亞磷酰胺接入到DNA的5'端得到Acrydite-DNA；取Acrydite-DNA，加入緩沖液，混合物在80-95℃下反應，然后緩慢冷卻至室溫。加入氯化血紅素在室溫下孵育10-60min，優選20-40min，制得DNAzyme；

(2)向制備好的DNAzyme溶液中依次加入丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺，葡萄糖氧化酶溶液、10％過硫酸銨、10％N,N,N',N'-四甲基乙二胺，迅速混勻后，室溫靜置，用相機記錄反應完之后膠塊的狀態。

5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述的緩沖液為：30-80mM嗎啉乙磺酸(MES)pH 6-7；50-200mM三羥甲基氨基甲烷(Tris)-醋酸鹽緩沖液；20-50mM醋酸鉀；1％二甲基亞砜(DMSO)；0.05％Triton X-100。

6.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，丙烯酰胺單體和甲叉雙丙烯酰胺的摩爾比為7～30:1，丙烯酰胺單體和DNAzyme的摩爾比為10～2000:1，優選：800:1至100:1。

7.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中葡萄糖氧化酶溶液的濃度為5～1000μM，優選為50～500μM。

8.權利要求1-3任何一項所述的葡萄糖氧化酶-DNAzyme復合水凝膠在葡萄糖檢測中的應用。

9.如權利要求8所述的應用，其特征在于，所述的復合水凝膠能夠且不限于應用于葡萄糖的比色檢測及對復雜生物樣品中葡萄糖的直接比色檢測。

10.如權利要求9所述的應用，其特征在于，將葡萄糖氧化酶-DNAzyme復合水凝膠塊放入被檢測葡萄糖樣品溶液中，隨后加入染料指示劑，根據水凝膠的顏色變化，定性且半定量地判定葡萄糖濃度，所述的染料指示劑為3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺或2,2-聯氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽。