[發明專利]TSPO在治療腦膠質瘤中的應用及重組單純皰疹病毒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201711251406.7
• 申請日: 2017-12-01
• 公開（公告）號: CN108004216B
• 公開（公告）日: 2019-03-05
• 發明（設計）人: 劉福生;李小鵬;田超;張俊文
• 申請（專利權）人: 北京市神經外科研究所;北京神源德生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K35/763;A61P35/00;C12R1/93
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 喬雪微;劉依云

本發明涉及基因工程領域，公開了一種重組單純皰疹病毒、所述重組單純皰疹病毒的制備方法和應用。具體地，重組單純皰疹病毒包括載體和外源核苷酸序列，載體為缺失編碼ICP34.5和ICP47的基因、以及可選的缺失編碼ICP6、TK和UNG的基因中的至少一種的單純皰疹病毒，外源核苷酸序列的插入位點為載體上缺失編碼ICP34.5、ICP47、ICP6、TK和UNG的基因的位置中的至少一處；外源核苷酸序列包括具有能夠降低TSPO基因表達水平的核苷酸序列。以及降低腦膠質瘤細胞中TSPO基因的表達水平在制備治療腦膠質瘤的藥物中的應用。本發明的重組單純皰疹病毒具有良好的抗腦膠質瘤效果。

技術領域

本發明涉及基因工程領域，具體涉及降低腦膠質瘤細胞中TSPO基因的表達水平在制備用于治療腦膠質瘤的藥物中的應用，以及重組單純皰疹病毒及其制備方法和應用。

背景技術

腦膠質瘤是中樞神經系統最常見的腫瘤，世界衛生組織(World HealthOrganization，WHO)將腦膠質瘤分為Ⅰ～Ⅳ四個級別，Ⅰ、Ⅱ為低級別膠質瘤，Ⅲ、Ⅳ為高級別膠質瘤，其中高級別膠質瘤的侵襲性強，患者預后更差，其中位生存期僅分別為18個月(Ⅲ)及12個月(Ⅳ)。腦膠質瘤的治療通常采用手術切除，輔助以放療和化療等綜合治療；但腦膠質瘤手術難以完全切除，復發率較高，極易對放化療產生耐受，所以腦膠質瘤患者生存期短，預后差，對人類的健康構成了極大的威脅。盡管近年來腦膠質瘤多種新興治療手段不斷取得進展，但其預后仍不盡如人意，患者生存期仍然未有明顯改善。

溶瘤病毒治療是治療腦膠質瘤的新型方法之一。溶瘤病毒是通過刪除病毒基因組上的特定基因從而賦予溶瘤病毒選擇性在腫瘤細胞內復制擴增能力，獲得腫瘤殺傷效果，同時改構后的溶瘤病毒在正常細胞中無法復制，因而具備較高的安全性。溶瘤病毒適合治療腦膠質瘤主要因為腦膠質瘤幾乎發生在一個器官內部而不發生轉移，有利于溶瘤病毒在局部復制和瘤內的擴增。此外，腦膠質瘤周圍幾乎都是有絲分裂后的細胞，溶瘤病毒更傾向于在分裂旺盛的腫瘤細胞中復制。HSV-1溶瘤病毒是最早應用在腦膠質瘤上的病毒。1991年Martuza等人刪除HSV-1病毒的TK基因，實驗證明HSV-1病毒能夠選擇性殺傷腦膠質瘤細胞系，抑制種植于小鼠的腦膠質瘤的生長并提高小鼠生存率。此后20年，約有15種溶瘤病毒在腦膠質瘤上進行測試，其中7種進入臨床試驗階段，包括HSV-1溶瘤病毒1716、G207、G47Δ和M032。HSV-1溶瘤病毒成為進展最快、進入臨床試驗最多的溶瘤病毒。臨床試驗結果表明HSV-1溶瘤病毒在腦膠質瘤治療上具有良好的安全性。

但是HSV-1溶瘤病毒有效性依然不能滿足治療需求。導致HSV-1溶瘤病毒療效較低的原因包括腦膠質瘤的快速生長導致溶瘤病毒相對數量和復制能力的低下。因此，尋求一種能夠降低腦膠質瘤生長速度以期為HSV-1溶瘤病毒提供充分的時間以殺傷腦膠質瘤細胞的方法勢在必行。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術存在的上述缺陷，提供降低腦膠質瘤細胞中TSPO基因的表達水平在制備用于治療腦膠質瘤的藥物中的應用，以及一種重組單純皰疹病毒及其制備方法和應用。本發明提供的重組單純皰疹病毒能夠有效的降低腦膠質瘤的生長速度，并且使用后副反應小，具有良好的應用前景。

為了實現上述目的，第一方面，本發明提供了一種重組單純皰疹病毒，所述重組單純皰疹病毒包括載體和外源核苷酸序列，所述載體為缺失編碼ICP34.5和ICP47的基因、以及可選的缺失編碼ICP6、TK和UNG的基因中的至少一種的單純皰疹病毒，所述外源核苷酸序列的插入位點為所述載體上缺失編碼ICP34.5、ICP47、ICP6、TK和UNG的基因的位置中的至少一處；

其中，所述外源核苷酸序列包括具有能夠降低TSPO基因表達水平的核苷酸序列的片段。