[發明專利]一種細胞內小分子代謝物的鑒定方法

在審

• 申請號: 201711251029.7
• 申請日: 2017-12-01
• 公開（公告）號: CN109870498A
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 羅云;張保琴;耿檸波;王菲迪;任曉倩;張海軍;陳吉平
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發明提供了一種細胞內小分子代謝物的鑒定方法。根據精確質量數及色譜圖匹配對代謝物進行定性，根據譜圖的豐度對代謝物進行相對定量。該分析方法流程如下：將培養的貼壁細胞用PBS快速清洗后使用液氮淬滅；然后加入萃取液提取細胞內的全部代謝物；檢索KEGG與METLIN數據庫獲得代謝通路主要代謝物的離子對與碰撞能等參數，建立小分子代謝物的檢測分析方法；采用串聯四級桿線性離子阱高性能質譜(Q?Trap)結合四級桿?飛行時間質譜(Q?TOF)對細胞內的代謝物進行定性定量分析。本發明可以用于細胞樣品中代謝產物的定性定量分析該方法檢測鑒定到的代謝物的范圍更廣，代謝物的線性范圍更寬，有效解決了目前分析代謝物定性難且需要大量的標準品作對照的問題。

技術領域

本發明是一種細胞內小分子代謝物的鑒定方法，具體地說是通過檢索KEGG數據庫(http://www.kegg.jp/kegg/)和METLIN數據庫(https://metlin.scripps.edu/)，獲得代謝物的結構信息、脂水分配系數與液相色譜-四級桿飛行時間質譜儀(LC-Q-TOF)的MS/MS色譜圖信息(精確質量數、豐度、碰撞能及質譜檢測模式)，根據精確質量數及色譜圖匹配對代謝物進行定性，采用串聯四級桿線性離子阱高性能質譜(Q-trap)對細胞內的代謝物進行定量分析。該方法區別于通過標準品進行代謝物定性的方法，是對細胞內小分子代謝物的鑒定一種新方式。

背景技術

分子量低于1000道爾頓的小分子量代謝物是包括細胞信號傳導與代謝網絡在內的許多生物進程中的重要調節者。對這些代謝物進行分析可以提供細胞狀態的功能讀出。代謝組學可以被定義為在給定生物樣品中全部代謝物的綜合分析。代謝組學分析已被廣泛用于生物學中基本機制的研究，臨床生物標記物鑒定以及藥物研究。該技術已被證明為一種用于復雜生物系統中調節機制評估的有力分析策略許多分析平臺用于代謝組學研究，包括核磁共振(NMR)、質譜(MS)與氣相色譜(GC)、毛細管電泳(CE)、液相色譜(LC)以及超臨界流體色譜法(SFC)聯用。[A.R.Fernie,R.N.Trethewey,A.J.Krotzky and L.Willmitzer,NATURE REVIEWS MOLECULAR CELL BIOLOGY.,Innovation-Metabolite profiling:fromdiagnostics to systems biology,5(2004)763–769.]