[發(fā)明專利]一種高成活率的鐵皮石斛組培苗培育方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201711247832.3
• 申請日: 2017-12-01
• 公開（公告）號: CN107711517A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋劍春
• 申請（專利權(quán)）人: 江西宋氏靈斛生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廈門市精誠新創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司35218
• 代理人: 方惠春

1.一種高成活率的鐵皮石斛組培苗培育方法，其特征在于，步驟如下：

1）選取成熟未開裂的鐵皮石斛蒴果，采用清水沖洗后，放入0.1%升汞溶液中浸泡3-4min，取出后，采用無菌水沖洗2-3次，然后放入預(yù)處理液中浸泡7-10min，取出后，采用無菌水沖洗4-5次，吸干表面水分，獲得預(yù)處理鐵皮石斛蒴果，所述預(yù)處理液由檸檬酸和酒精組成；

2）將預(yù)處理鐵皮石斛蒴果切開，將種子均勻散布在萌發(fā)培養(yǎng)基上，在組培室內(nèi)進行培養(yǎng)，在溫度為22-24℃、光照時間為8h/d、光照強度為1000-1200lux的條件下培養(yǎng)19-22天，獲得原球莖；

3）將原球莖轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基中，在溫度為23-25℃、光照時間為8h/d、光照強度為2000-2500lux的條件下培養(yǎng)24-25天，獲得類原球莖；

4）將類原球莖轉(zhuǎn)接至分化培養(yǎng)基中，在溫度為23-25℃、光照時間為12h/d、光照強度為2000-2500lux的條件下培養(yǎng)26-28天，獲得幼苗；

5）將幼苗轉(zhuǎn)接至含有育苗培養(yǎng)基的組培瓶中，在溫度為23-25℃、光照時間為15h/d、光照強度為2800-3000lux的條件下培養(yǎng)80-90天，獲得壯苗；

6）將含有壯苗的組培瓶送入煉苗房內(nèi)，進行12-15天的煉苗，獲得煉后苗；

7）將煉后苗從組培瓶中取出，采用清水洗除根部攜帶的培養(yǎng)基，即可獲得組培苗。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高成活率的鐵皮石斛組培苗培育方法，其特征在于，所述預(yù)處理液的制備方法為：取10g檸檬酸，投入至100mL的85%酒精中，攪拌混合均勻后，即可。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高成活率的鐵皮石斛組培苗培育方法，其特征在于，所述萌發(fā)培養(yǎng)基由1/2MS培養(yǎng)基和萌發(fā)促進液組成。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的高成活率的鐵皮石斛組培苗培育方法，其特征在于，所述萌發(fā)培養(yǎng)基的制備方法如下：取野馬追，清洗，烘干后，粉碎，投入至滲漉器中，采用12-15倍重量的70%酒精進行滲漉處理，獲得滲漉提取液和滲漉殘渣，將滲漉殘渣加入4-5倍重量的70%酒精，然后超聲波處理40-50min，過濾，獲得超聲波提取液和超聲波提取殘渣，將滲漉提取液和超聲波提取液合并，加入總重量3%的殼寡糖，攪拌混合均勻后，蒸發(fā)濃縮為原體積的20%，即得萌發(fā)促進液，將萌發(fā)促進液按照30g/L的量加入至1/2MS培養(yǎng)基中，即可。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的高成活率的鐵皮石斛組培苗培育方法，其特征在于，所述增殖培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基并加入10g/L香蕉汁和2g/L乙二胺四乙酸二鈉組成。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的高成活率的鐵皮石斛組培苗培育方法，其特征在于，所述分化培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基并加入15g/L山藥汁和0.4g/L萘乙酸組成。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的高成活率的鐵皮石斛組培苗培育方法，其特征在于，所述育苗培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基和育苗促進液組成。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的高成活率的鐵皮石斛組培苗培育方法，其特征在于，所述育苗培養(yǎng)基的的制備方法如下：取烏蘞莓干草，清洗，烘干后，粉碎，投入至滲漉器中，采用10-12倍重量的70%酒精進行滲漉處理，獲得滲漉提取液和滲漉殘渣，將滲漉殘渣加入6-8倍重量的70%酒精，然后超聲波處理40-50min，過濾，獲得超聲波提取液和超聲波提取殘渣，將滲漉提取液和超聲波提取液合并，加入總重量5%的殼寡糖，攪拌混合均勻后，蒸發(fā)濃縮為原體積的15%，即得育苗促進液，將育苗促進液按照20g/L的量加入至MS培養(yǎng)基中，即可。