[發明專利]一種快速檢測土霉素孔板發酵液效價的方法

在審

• 申請號: 201711237849.0
• 申請日: 2017-11-30
• 公開（公告）號: CN108007882A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發明（設計）人: 韓鵬軍;李書至;劉娟;李大攀;李俊;陳星
• 申請（專利權）人: 駐馬店華中正大有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 鄭州立格知識產權代理有限公司 41126
• 代理人: 李紅衛

1.一種快速檢測土霉素孔板發酵液效價的方法，其特征在于，由以下步驟制備而成：

（1）稱取土霉素標準品，用0.01mol/L的鹽酸溶解配成1000u/ml的母液，然后再用超純水將配成的土霉素標準品母液分別稀釋成5u/ml、10u/ml、15u/ml、20u/ml、25u/ml、30u/ml、35u/ml、40u/ml；

（2）分別吸取200μl步驟（1）中各個濃度的土霉素標品至酶標板中，以超純水為對照，用酶標儀于290-292nm波長下檢測各濃度土霉素標準品溶液的吸收值，以濃度y為縱坐標、吸收值x為橫坐標作圖，求得x、y的函數關系式，要求相關系數r>0.999；

（3）取土霉素斜面孢子制成單孢子懸液置于深孔板內進行發酵得到土霉素發酵液，每個孔中土霉素斜面孢子制成單孢子懸液體積相同；

（4）向每個孔中的土霉素發酵液加入等體積等濃度的草酸震蕩混勻，得到酸化的土霉素發酵液，將酸化后的土霉素發酵液進行離心；

（5）吸取離心后土霉素發酵液的上清液置于96孔酶標板中，所述的每個孔中土霉素發酵液的上清液體積相同，加入超純水稀釋100~200倍，混合均勻后，然后用酶標儀于290-292nm下檢測吸光值；

（6）將步驟（5）中檢測的吸光值x帶入函數關系式中計算得濃度值y，使用濃度值計算得土霉素孔板發酵液效價，計算公式如下：濃度值×稀釋倍數=孔板發酵液效價。

2.根據權利要求1所述的一種快速檢測土霉素孔板發酵液效價的方法，其特征在于，所述的步驟（3）中，深孔板的為48孔深孔板，并且每個孔中土霉素發酵培養基的體積為1.0~1.2ml。

3.根據權利要求1所述的一種快速檢測土霉素孔板發酵液效價的方法，其特征在于，所述的步驟（5）中，孔板的為96孔酶標板，并且每個孔中土霉素發酵液的上清液稀釋倍數為100-200倍，體積為200ul。

4.根據權利要求1所述的一種快速檢測土霉素孔板發酵液效價的方法，其特征在于，所述的草酸的摩爾濃度為0.5~1.0mol/L。

5.根據權利要求1所述的一種快速檢測土霉素孔板發酵液效價的方法，其特征在于，所述的步驟（4）中離心所使用的轉速為3000~4000r，離心時間為10~20min。