[發明專利]紅藻蛋白多肽復配物的制備方法

在審

• 申請號: 201711237562.8
• 申請日: 2017-11-30
• 公開（公告）號: CN108208848A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 全盈園
• 申請（專利權）人: 金華市鐵騎士生物科技有限公司
• 主分類號: A23L33/165
• 分類號: A23L33/165;A23L33/17;A23L33/185;A23J3/34;A23J3/20;A23J1/00
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

1.紅藻蛋白多肽復配物的制備方法，包括：提取紅藻蛋白、制備紅藻蛋白多肽、制備螯合鈣、制備復配物，其特征在于：所述制備紅藻蛋白多肽步驟為：將粗蛋白粉末按料液比1:10-12溶解于蒸餾水中，加入粗蛋白粉末5000-5600u/g的中性蛋白酶酶解，在酶解過程的中間階段加入（R）-1,1’-聯萘-2,2’-酚基二異丙氧鈦；酶解完成后高溫滅酶，經4000-4500r/min、2-4℃離心30-45分鐘，取上清液低溫干燥得紅藻蛋白多肽。

2.根據權利要求1所述的紅藻蛋白多肽復配物的制備方法，其特征在于：所述制備紅藻蛋白多肽步驟中，酶解溫度為45-47℃，酶解pH6.6-6.8，酶解時間為30-45分鐘。

3.根據權利要求1所述的紅藻蛋白多肽復配物的制備方法，其特征在于：所述制備紅藻蛋白多肽步驟中，（R）-1,1’-聯萘-2,2’-酚基二異丙氧鈦的添加量為中性蛋白酶重量的12-18‰。

4.根據權利要求1所述的紅藻蛋白多肽復配物的制備方法，其特征在于：所述提取紅藻蛋白步驟為：將紅藻泥溶于濃度為1-2mmol/L、pH為7.0-7.2的PBS緩沖液中，搖勻后置于-10～-20℃冷凍，30-60分鐘后以14-18℃解凍，反復凍融2-3次，在冰浴條件下超聲波破碎處理30-45分鐘，間隙時間1-2s，超聲時間2-4s；取破碎液在2-4℃、10000-12000r/min條件下離心30-35分鐘收集上清液進行硫酸銨沉淀；將沉淀用濃度為0.01-0.02mol/L、pH為7.0-7.4的PBS緩沖液溶解后裝入截留量為8-14 ku的透析袋透析去鹽，再次離心，收集上清液，真空冷凍干燥成紅藻蛋白干粉。

5.根據權利要求4所述的紅藻蛋白多肽復配物的制備方法，其特征在于：所述提取紅藻蛋白步驟中，硫酸銨沉淀的操作步驟為：在上清液加入硫酸銨達到28%的飽和度，攪拌30-45分鐘，0-2℃靜置過夜，離心后收集上清液加入硫酸銨達到55%的飽和度，0-2℃靜置過夜后離心收集沉淀。

6.根據權利要求1所述的紅藻蛋白多肽復配物的制備方法，其特征在于：所述制備螯合鈣步驟為：將紅藻蛋白多肽復溶成20-25%的肽液，調整pH為8.2-8.5，加入無水氯化鈣、維生素C，震蕩混勻后，在23-25℃恒溫螯合，螯合45-60分鐘后，加入溶液體積6-7倍的無水乙醇，靜置沉淀3-5小時后，在2-4℃、6000-6500r/min條件下離心30-45分鐘，取下層沉淀物凍干得紅藻蛋白多肽螯合鈣粉。

7.根據權利要求6所述的紅藻蛋白多肽復配物的制備方法，其特征在于：所述制備螯合鈣步驟中，無水氯化鈣的添加量為紅藻蛋白多肽質量的2-3倍，維生素C的添加量為紅藻蛋白多肽質量的5-6‰。

8.根據權利要求1所述的紅藻蛋白多肽復配物的制備方法，其特征在于：所述制備復配物步驟為：將紅藻蛋白多肽復溶成10-12%的肽液，調節pH值至7.2-7.5，取80-100份肽液，加入氯化亞鐵溶液、維生素C，在30-33℃溫度下震蕩合成20-30分鐘，于2-4℃、6000-7000r/min條件下離心濃縮20-45分鐘，棄沉淀，上清液低溫干燥后即得紅藻蛋白多肽亞鐵螯合粉，將紅藻蛋白多肽螯合鈣粉與紅藻蛋白多肽亞鐵螯合粉按照1:2-3的比例混合即得紅藻蛋白多肽復配物。

9.根據權利要求8所述的紅藻蛋白多肽復配物的制備方法，其特征在于：所述制備復配物步驟中氯化亞鐵溶液的濃度為1.0-1.2mol/L、添加量為120-150份，維生素C的添加量為3-4mg。