[發明專利]一種HSCCC-DPPH聯用在線活性分析及分離麥冬高異黃酮的方法

在審

• 申請號: 201711237404.2
• 申請日: 2017-11-30
• 公開（公告）號: CN108129467A
• 公開（公告）日: 2018-06-08
• 發明（設計）人: 周一峰;王麗玲;呂炬烽;葛青;毛建衛
• 申請（專利權）人: 浙江科技學院;浙江省林業科學研究院
• 主分類號: C07D407/06
• 分類號: C07D407/06;C07D311/38;C07D311/40;G01N30/02
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

1.一種HSCCC-DPPH聯用在線活性分析及分離麥冬高異黃酮的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）樣品準備

取麥冬的粗提物或乙酸乙酯萃取物或經初步分離的化學部位，用旋轉蒸發儀蒸干除去溶劑，得到濃縮后的樣品，備用；

2）HSCCC流動相與固定相準備

選擇合適HSCCC兩相溶劑體系，按體積比及先后順序將溶劑加入分液漏斗，振搖，使溶劑混勻，靜置過夜上相為流動相，下相為固定相，超聲脫氣20min，靜置至室溫，備用；

3）DPPH流動相溶液準備

精密稱取DPPH，用色譜甲醇定容于容量瓶，搖勻溶解，用微孔濾膜過濾，濾液裝入棕色瓶，超聲脫氣15min，靜置至室溫，備用；

4）HSCCC-DPPH系統的平衡與連接

以10～20mL/min 的流速往HSCCC儀中泵入固定相，待管路完全充滿固定相后以600～1000rpm轉動主機，同時以1～3mL/min 的速度泵入流動相，至HSCCC系統平衡；應用輸液泵入DPPH溶液至檢測器基線平衡；用連接管連接HSCCC和輸液泵，HSCCC流動相經檢測器1流出后，與輸液泵入DPPH溶液在線混合，再進入檢測器2分析，直至HSCCC和DPPH各自所對應的檢測器基線平衡，所用設備為的高速逆流色譜儀、輸液泵和2臺紫外-可見光譜分析檢測系統的聯用設備；

5）樣品的分析及分離

將樣品用高速逆流色譜選用溶劑系統溶解，濾膜過濾，通過HSCCC主機進樣系統進樣，通過2臺檢測器監測可以實現對麥冬活性成分的在線分析；如果需要分離獲得相對應的活性成分，則斷開HSCCC-DPPH連接，再次進樣后根據HSCCC圖譜收集相應峰位置流動相，蒸干即得；或者在HSCCC流動相進入檢測器之前連接一個可調節分液器，一部分液體進入HSCCC檢測器分析而后與輸液泵入的DPPH溶液混后進入液相檢測器，另一部分可以同步收集流動相，實現活性成分的同步分析與分離。

2.如權利要求1所述的一種HSCCC-DPPH聯用在線活性分析及分離麥冬高異黃酮的方法，其特征在于所述的步驟1）中以麥冬塊根或須根為原料，采用乙醇或甲醇提取獲得麥冬的粗提物；以麥冬塊根或須根為原料，經過乙酸乙酯萃取獲得乙酸乙酯萃取物；以麥冬塊根或須根為原料，經過大孔樹脂或硅膠柱層析得到初步分離的化學部位。

3.如權利要求1所述的一種HSCCC-DPPH聯用在線活性分析及分離麥冬高異黃酮的方法，其特征在于所述的步驟2）中所述的HSCCC兩相溶劑體系為正己烷∶乙酸乙酯∶乙醇∶乙腈∶水V/V/V/V/V=1～2.5:1～2.5: 1～1.5:0～1.5:1～1.5的溶液體系；正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶乙腈∶水V/V/V/V/V=1～6:1～3:1～3:0～3:1～2的溶液體系。

4.如權利要求1所述的一種HSCCC-DPPH聯用在線活性分析及分離麥冬高異黃酮的方法，其特征在于所述的步驟3）中所述的DPPH溶液濃度為0.05～1mmol/L。

5.如權利要求1所述的一種HSCCC-DPPH聯用在線活性分析及分離麥冬高異黃酮的方法，其特征在于所述的步驟4）中檢測器1檢測波長285nm，檢測器2檢測波長517nm。