[發明專利]一種檢測砧木和接穗親和力的方法

有效

• 申請號: 201711235240.X
• 申請日: 2017-11-30
• 公開（公告）號: CN107907516B
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發明（設計）人: 郭容芳;徐涵;陳曉東;賴鐘雄
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊;李翠娥

本發明提供了一種檢測砧木和接穗親和力的方法，將帶有細胞程序性死亡基因/細胞分裂素基因和GFP信號的砧木和細胞程序性死亡基因/細胞分裂素基因和RFP信號的接穗培養到為三葉一心時，用嫁接刀按45度角切割后，通過激光共聚焦觀察細胞分裂素和細胞程序性死亡基因所帶的GFP或RFP的信號分布和強弱，分析砧木和接穗的傷口愈合，進而判斷其親和性；利用熒光蛋白信號的強弱分析砧木中帶有熒光標記的細胞程序性死亡基因和細胞分裂素基因的表達情況。若砧木和接穗中細胞程序性死亡基因的信號弱，而且砧木和接穗中細胞分裂素基因的信號強，說明砧木和接穗的親和性高；若砧木和接穗中細胞程序性死亡基因的信號強，而且砧木和接穗中細胞分裂素基因的信號弱，說明砧木和接穗的親和性低。

技術領域

本發明屬于嫁接技術領域，具體涉及一種檢測砧木和接穗親和力的方法。

背景技術

熒光蛋白如綠色熒光蛋白GFP在藍色波長范圍的光線激發下，會發出綠色熒光，紅色熒光蛋白RFP在紫外光的照射下會發出紅光，在生物學中經常被用作報告基因。目前砧木和接穗之間的親和力鑒定主要通過嫁接后植株的成活率以及接穗的生長情況和結果特性來判定。在分子水平上尚缺乏砧木和接穗親和力評估的方法。

本申請通過構建帶有熒光蛋白報告基因的細胞分裂素基因和細胞程序性死亡基因載體，轉入砧木和接穗，可以追蹤傷口愈合過程中砧木和接穗的功能，分析其信號強弱，從而判定砧木和接穗的親和性。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種檢測砧木和接穗親和力的方法。該方法能從分子水平上評估砧木和接穗的親和力，準確性高，方便實用。

為實現上述發明目的，本發明采用如下技術方案：

一種檢測砧木和接穗親和力的方法，包括以下步驟：

1）取同一種砧木兩份：砧木1和砧木2，取同一種接穗兩份：接穗1和接穗2；

2）將帶有細胞程序性死亡基因的GFP和RFP分別活化后轉入農桿菌，然后將帶有GFP信號的載體轉入砧木1，帶有RFP信號的載體轉入接穗1，獲得帶有熒光信號的砧木1和接穗1；

3）將帶有細胞分裂素基因的GFP和RFP分別活化后轉入農桿菌，然后將帶有GFP信號的載體轉入砧木2，帶有RFP信號的載體轉入接穗2，獲得帶有熒光信號的砧木2和接穗2；

4）將待檢測植物的砧木和接穗在基質中培養四周，苗子為三葉一心時，用嫁接刀按45度角切割后，砧木1和接穗1、砧木2和接穗2分別通過嫁接夾固定，在濕度為85%-90%的黑暗25℃環境下生長，之后逐漸增強光照降低濕度，保證傷口愈合；

5）嫁接后每3天，通過激光共聚焦觀察細胞分裂素和細胞程序性死亡基因所帶的GFP或RFP的信號分布和強弱，分析砧木和接穗的傷口愈合，進而判斷其親和性。