[發明專利]一種松毛蟲質型多角體病毒和白僵菌殺蟲懸浮劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201711234385.8
• 申請日: 2017-11-30
• 公開（公告）號: CN107926986A
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發明（設計）人: 靳亮;黃朝;梁小文;王金昌;關麗梅;占智高;曾升華
• 申請（專利權）人: 江西省科學院微生物研究所
• 主分類號: A01N63/04
• 分類號: A01N63/04;A01N63/00;A01N47/34;A01N25/04;A01P7/04
• 代理公司: 北京卓特專利代理事務所(普通合伙)11572
• 代理人: 段宇

1.一種松毛蟲質型多角體病毒的毒株，其特征在于：該毒株為馬尾松毛蟲質型多角體病毒；保藏名稱為馬尾松毛蟲質型多角體病毒DpCPV-JL Dendrol imus punctatus cytoplasmic polyhedrosis viruses-DpCPV-JL，保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是中國武漢大學；保藏日期：2016年4月1日；保藏編號：CCTCC No.V201607。

2.一種球孢白僵菌菌株，其特征在于：該菌株為球孢白僵菌；保藏名稱為球孢白僵菌Beauveria bassiana；保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號；保藏日期：2013年08月13日；保藏編號：CGMCC No.7998。

3.一種松毛蟲質型多角體病毒和白僵菌殺蟲懸浮劑，其特征在于包括有效活性成分，所述活性成分為松毛蟲質型多角體病毒懸液和球孢白僵菌粉，所述活性成分占總制劑的質量百分比含量的2％-30％。

4.根據權利要求3所述的松毛蟲質型多角體病毒和白僵菌殺蟲懸浮劑，其特征在于包括按照重量百分比的如下組分組成：

5.根據權利要求4所述的松毛蟲質型多角體病毒和白僵菌殺蟲懸浮劑，其特征在于包括按照重量百分比的如下組分組成：

6.權利要求4所述的松毛蟲質型多角體病毒和白僵菌殺蟲懸浮劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

準確稱取權利要求1所述的質量百分比的各組分，依次加入100萬-200億PIB/mL的松毛蟲質型多角體病毒懸液、球孢白僵菌、納米級二氧化硅、芳香族氨基酸、精制熒光增白劑、木質素磺酸鈉、氟啶脲、甘油和無菌水，再攪拌均勻分裝，制得乳白色的松毛蟲質型多角體病毒和白僵菌殺蟲懸浮劑。

7.根據權利要求6所述的松毛蟲質型多角體病毒和白僵菌殺蟲懸浮劑的制備方法，其特征在于：制備松毛蟲質型多角體病毒懸液的方法：

病毒粗品經兩次差速離心，低速800rpm，離心5min，取上清；然后將上清高速：4000rpm，離心30min，取沉淀，去掉雜質，再經過一次蔗糖梯度離心純化，經計數后置于4℃冰箱備用；

以棉鈴蟲或甜菜夜蛾作為替代宿主增殖該松毛蟲質型多角體病毒，采用通用型人工飼料飼養宿主，將1×10⁶PIB/ml的病毒懸液均勻噴在養蟲盒內的人工飼料上，感染4齡幼蟲，從感染后的第4天至第10天收集患病死蟲，然后松毛蟲質型多角體病毒的分離、收集：將患病死蟲勻漿搗碎，離心后過200目紗布去渣，計數后備用，制得松毛蟲質型多角體病毒懸液；

所述通用型人工飼料配方包括按照重量百分比的如下組分組成：

8.根據權利要求7所述的松毛蟲質型多角體病毒和白僵菌殺蟲懸浮劑的制備方法，其特征在于：甜菜夜蛾或棉鈴蟲的飼養：

甜菜夜蛾的飼養：

將配制的人工飼料分裝于經消毒的孵化盒中，將經人工飼料繼代同步化的甜菜夜蛾適量卵塊條粘于養蟲盒蓋背面上；將孵化盒放入24-28℃、相對濕度為70-80％濕度、光照L:D的值為12:12hr的養蟲室，待幼蟲孵化直至化蛹；收取健康蛹，在5-10％甲醛液中消毒、漂洗、晾干后放入養蟲籠內，保持80％濕度。成蟲羽化后，將5W白熾燈放在產卵籠的一端，引誘雌蛾產卵于白紙上。每天定時更換產卵紙，卵紙經5-10％甲醛消毒、漂洗、晾干，再根據卵紙上卵粒的密度，將卵紙剪成小片放入養蟲盒中，進入下一次生活周期再循環；

棉鈴蟲的飼養：

面鈴蟲幼蟲有自相殘殺的生活習性，幼蟲需要單頭飼養，除此之外，其他飼養條件與甜菜夜蛾的飼養相同。