[發明專利]GR79-EPSPS的單克隆抗體試紙條及其應用

有效

• 申請號: 201711233545.7
• 申請日: 2017-11-30
• 公開（公告）號: CN108034637B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 郭三堆;張銳;孟志剛;梁成真;王遠;孫國清;朱濤;林敏;陸偉
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所;郭三堆
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/40;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/573;C12R1/91
• 代理公司: 北京修典盛世知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11424
• 代理人: 胡長遠

本發明公開了一對雜交瘤細胞株，該雜交瘤細胞對包括獨立存放的第一雜交瘤細胞株和第二雜交瘤細胞株；所述第一雜交瘤細胞株的保藏編號為CGMCC No.13482；所述第二雜交瘤細胞株的保藏編號為：CGMCC No.13481本發明還提供了由這2株雜交瘤細胞分泌的一對配對的單克隆抗體和它們在檢測GR79?EPSPS蛋白中的用途；此外，還公開了一種免疫膠體金試紙條。本發明通過免疫膠體金試紙條能夠對轉基因植物中存在的GR79?EPSPS蛋白進行定性定量檢測，具有特異性強、靈敏度高、簡單快速等優點。

技術領域

本發明屬于轉基因植物檢測技術領域，具體涉及一種雜交瘤細胞對和相應的單克隆抗體對，還涉及一種單克隆抗體膠體金試紙條。

背景技術

草甘膦(英文名：Glyphosate；商品名為：農達(Roundup))是美國孟山都公司開發的一種廣譜滅生性、內吸傳導型除草劑，其毒性機制主要是競爭性抑制莽草酸途徑中的EPSP合酶，導致莽草酸途徑中斷，芳香族氨基酸合成受阻，從而擾亂生物體的正常氮代謝，最終導致生物體死亡。草甘膦具有結構簡單、生產成本低、除草效果好、低毒無殘留等特點，是目前世界上使用面積最廣的除草劑品種。但作為一種非選擇性除草劑，它對農作物同樣具有滅生性作用，這大大限制了草甘膦在農業生產中的應用范圍。培育具有草甘膦抗性或降解性質的農作物，成為農業生產中應用草甘膦的前提。

抗草甘膦基因為某些特定物種中天然存在的拮抗草甘膦的基因，該基因編碼抗草甘膦酶(5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶，EPSPS)，從而使草甘膦喪失對含有該類基因的菌類或植物的毒害作用。利用基因工程等手段，將抗草甘膦的Epsps基因轉入植物體內培育抗草甘膦植物，是控制雜草的有效方法。

抗草甘膦的基因主要有草甘膦乙酰基轉移酶GAT基因、GR79-EPSPS和CP4-EPSPS基因等；其中GR79-EPSPS是中國農業科學院生物技術研究所發現的一種新的抗草甘膦基因(CN103981199A)。目前，我國已有多個抗草甘膦轉基因棉花品系進入環境釋放和生產試驗階段，如轉CP4-EPSPS抗草甘磷棉花、轉GR79EPSPS-GAT抗草甘磷棉花等。

對轉基因植物的檢測是對轉基因植物進行有效監管的基礎。對轉基因植物的鑒定檢測方法主要有：(1)蛋白免疫印跡檢測；(2)整合位點側翼序列PCR檢測；(3)外源基因特異引物PCR檢測；(4)Southern blot分子雜交檢測等，其中利用免疫學原理對目的蛋白特異性進行定性定量鑒定的蛋白免疫印跡檢測方法，是目前轉基因植物最精準的鑒定方法之一。利用外源蛋白抗體可以通過western blot和ELISA方法進行定性定量分析，檢測轉基因植物中目的蛋白在不同組織器官和不同環境條件下的表達水平(Joarrne等，1987；Nilogu等，1987；Nelson等，1988)。膠體金試紙法將特異的抗體交聯到試紙條上,利用膠體金試紙條技術制備的單克隆抗體試紙條，可以對轉基因幼苗或者種子進行快速的檢測鑒定(Lipton等,2000)。

發明內容

為了對GR79-EPSPS抗除草劑轉基因植物進行有效監管和對轉基因后代進行快速檢測，本發明主要目的在于提供對轉GR79-EPSPS基因植物中GR79-EPSPS蛋白的快速靈敏的檢測方法。

本發明目的在于提供一種雜交瘤細胞對。

本發明另一目的在于提供一種單克隆抗體對。

本發明第三目的在于提供上述雜交瘤細胞對在檢測GR79-EPSPS轉基因植物上的用途。

本發明第四目的在于提供上述單克隆抗體對在檢測GR79-EPSPS轉基因植物上的用途。

本發明第五目的在于提供一種單克隆抗體試紙條。

為實現上述目的，本發明的技術方案如下：