[發(fā)明專利]一種海洋細菌來源熱穩(wěn)定耐鹽SGNH家族水解酶及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711230133.8
• 申請日: 2017-11-29
• 公開（公告）號: CN107893060B
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發(fā)明（設計）人: 許學偉;霍穎異;洪利國;吳月紅;崔恒林;王春生
• 申請（專利權）人: 自然資源部第二海洋研究所
• 主分類號: C12N9/16
• 分類號: C12N9/16;C12N15/55
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 徐飛虎;徐關壽

1.一種具有水解酶活性的分離的多肽，其與SEQ ID NO:2的多肽所示序列一致。

2.編碼具有權利要求1所述多肽的多核苷酸，其與SEQ ID NO:1的核苷酸所示序列一致。

3.—種核酸構建體，其包含與一種或多種調控序列可操作地連接的權利要求2的多核苷酸，所述調控序列在合適的表達宿主中指導所述多肽的產生。

4.—種重組表達載體，其包含權利要求3的核酸構建體。

5.根據(jù)權利要求4所述的重組表達載體，其特征在于：所述的載體為原核表達載體pET系列載體，pQE系列載體；酵母表達載體pPICZ-α-A，pHIL-D2，pPIC9，pHIL-S1；或動物細胞表達載體pSVK3、pMSG。

6.根據(jù)權利要求5所述的重組表達載體，其特征在于：所述的載體為大腸桿菌表達載體pET28a。

7.一種宿主，其由權利要求4-6任一項所述的重組表達載體經轉化或轉染原核生物或真核生物宿主得到，其為細菌、酵母或哺乳動物細胞。

8.根據(jù)權利要求7所述的宿主，其為E.coli細菌、甲醇酵母或中國倉鼠卵巢細胞。

9.根據(jù)權利要求8所述的宿主，其為E.coli細菌。

10.一種產生權利要求1所述多肽的方法，其包括：

(a)、在有助于產生水解酶的條件下培養(yǎng)權利要求7所述的重組宿主細胞，其中所述宿主細胞包含SEQ ID NO:1所示核苷酸；

(b)、回收所述多肽。

11.權利要求1所述的多肽或權利要求7所述的能表達多肽的宿主在催化C2-C8短鏈脂肪酸酯或C10-C14長碳鏈脂肪酸酯類水解中的應用。

12.根據(jù)權利要求11所述的應用，其特征在于，所述的C2-C8短鏈脂肪酸酯為具有C2-C8短碳鏈的對硝基苯酚酯。

13.根據(jù)權利要求12所述的應用，其特征在于，所述的C2-C8短鏈脂肪酸酯為對硝基苯酚乙酸酯、對硝基苯酚丁酸酯、對硝基苯酚己酸酯和對硝基苯酚辛酸酯。

14.根據(jù)權利要求11-13任一項所述的應用，其特征在于，所述的水解酶催化水解溫度范圍為15～60℃。

15.根據(jù)權利要求14所述的應用，其特征在于，所述的水解酶催化水解溫度范圍為40℃。

16.根據(jù)權利要求11-13任一項所述的應用，其特征在于，所述的水解酶催化水解的pH值為6.0～10.5。

17.根據(jù)權利要求16所述的應用，其特征在于，所述的水解酶催化水解pH值為7.5。