[發(fā)明專利]一種不動桿菌Y-3及其L-天冬酰胺酶基因的表達與應用

在審

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• 申請日: 2017-11-29
• 公開（公告）號: CN108728371A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發(fā)明（設計）人: 呂鳳霞;焦琳舒;陸兆新;張充;別小妹;趙海珍
• 申請（專利權）人: 南京農業(yè)大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/55;C12N15/70;C12N15/75;A23L5/20;C12R1/01
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 孫昱

1.一種來源于土壤的不動桿菌（Acinetobacter soli）Y-3，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號是CGMCC NO:14813。

2.一種L-天冬酰胺酶基因AsAase，其特征在于，其來源于權利要求1所述的不動桿菌（Acinetobacter soli）Y-3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.權利要求2所述的L-天冬酰胺酶基因AsAase編碼的L-天冬酰胺酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.一種L-天冬酰胺酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）對權利要求2所述的L-天冬酰胺酶基因AsAase進行PCR擴增；

（2）構建L-天冬酰胺酶基因AsAase原核表達載體；

（3）重組L-天冬酰胺酶在原核細胞中進行表達。

5.根據權利要求4所述的L-天冬酰胺酶的制備方法，其特征在于，步驟（1）中PCR擴增采用以下引物：

F1-SacI：CGAGCTCATGAATAAAATTGCCTTAATTT；

R1- XhoI：CCGCTCGAGTTAATCCTCAGCCTTAATGGTGG；

F2- BglII：TGCAAAAGCCGCAGCAGATCTATGAATAAAATTGCCTT；

R2- KpnI：GAATTCGAGCTCCCGGGTACCTTAATCCTCAGCCTTA。

6.根據權利要求4所述的L-天冬酰胺酶的制備方法，其特征在于，步驟（1）中PCR擴增體系為：2×Taq Master Mix 25μL，DNA模板2μL，dd H₂O 19μL，上下游引物各2μL；PCR擴增條件：94℃預變性3 min；94℃變性50s，50℃退火50s，72℃延伸60s，30個循環(huán)；72℃延伸10min。

7.根據權利要求4所述的L-天冬酰胺酶的制備方法，其特征在于，步驟（2）中所用表達載體為pET-30a、pET-32a、PCBS221或PCBS345中的任意一種。

8.根據權利要求4所述的L-天冬酰胺酶的制備方法，其特征在于，步驟（3）中所用原核表達宿主為大腸桿菌或枯草芽孢桿菌。

9.權利要求3所述的L-天冬酰胺酶在食品抑制丙烯酰胺產生中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，將原料浸泡在濃度為20-30 IU/mL的L-天冬酰胺酶溶液中，其物料比為1:2-1:3，浸泡溫度35-40℃，時間0.5-1.5h。