[發明專利]一株高效抑制黃曲霉合成黃曲霉毒素的非脫羧勒克菌生防菌株

有效

• 申請號: 201711228608.X
• 申請日: 2017-11-29
• 公開（公告）號: CN107779422B
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 李培武;王同;丁小霞;張文;張奇
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23L5/20;A01N63/20;A01P3/00;C12R1/01
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

本發明屬微生物領域，具體涉及一株高效抑制黃曲霉合成黃曲霉毒素的非脫羧勒克菌生防菌株。非脫羧勒克菌生防菌株Wt16，已于2017年6月13日保藏于中國典型培養物保藏中心，簡稱CCTCC，保藏編號為CCTCC No.M 2017331。本發明首次從花生莢果中分離出的非脫羧勒克菌菌株Wt16能顯著抑制黃曲霉產毒，對不同來源的花生黃曲霉產毒也有極好的抑制效果?？捎糜谝种泣S曲霉菌產生黃曲霉毒素，防治糧食作物的黃曲霉毒素污染。

技術領域

本發明屬微生物領域，具體涉及一株高效抑制黃曲霉合成黃曲霉毒素的非脫羧勒克菌生防菌株及其應用。

背景技術

黃曲霉菌是一種病原性真菌，能產生一類強致癌有劇毒的真菌毒素-黃曲霉毒素，包括B、G和M族，其中B1最普遍且毒性最強。其能廣泛污染花生，玉米等糧食作物，嚴重威脅人及家畜的健康，并造成極大的經濟損失。因此，加強黃曲霉及毒素污染的防控刻不容緩。

目前，在對黃曲霉菌的防治中，有物理、化學、生物三種防治方法。但化學防治不但成本高，且易污染環境，在防控病原菌的同時病原菌也易對化學藥劑產生耐藥性甚至抗藥性。物理防治有費時費力、去毒率不高、易造成營養物質流失。而生物法具有安全、高效、持久的優點。因此，加強黃曲霉菌生物防控的研究對我國農業產業及經濟效益具有重要的意義。

非脫羧勒克菌在環境和臨床標本中很少分離得到，目前的報道一般是從血液、傷口分泌物、膽囊組織、腹膜透析液、尿液中分離獲得。另外，現有研究中暫未見非脫羧勒克菌抑制黃曲霉的報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提供一株高效抑制黃曲霉合成黃曲霉毒素的非脫羧勒克菌生防菌株及其應用。本發明首次從花生莢果中分離出一株對黃曲霉有較好防效的非脫羧勒克菌菌株Wt16，其能顯著抑制黃曲霉產毒，對不同來源的花生黃曲霉產毒也有極好的抑制效果。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：

非脫羧勒克菌生防菌株Wt16(Leclercia adcarboxglata)，已于2017年6月13日保藏于中國典型培養物保藏中心，簡稱CCTCC，保藏地址：中國，武漢，武漢大學，保藏編號為CCTCC No.M 2017331。

本發明首次從花生莢果中分離出一株對黃曲霉產毒有抑制作用的非脫羧勒克菌菌株。篩選方法：將于湖北黃陂花生地里采集的花生莢果用自來水沖洗后放入LB固體培養基中培養，將長出的細菌用接種環挑出轉接到新鮮的LB固體培養基中進行平板劃線，多次轉接后挑取單菌落，通過在培養基中與黃曲霉共培養實驗，即：花生離體接種黃曲霉進行共培養抑菌實驗，測其產毒力，最終篩選出一株對黃曲霉產毒有顯著作用的非脫羧勒克菌生防菌株Wt16，保藏于中國典型培養物保藏中心，簡稱CCTCC，保藏編號為CCTCC No.M2017331。

利用16S rDNA特異性擴增技術結合形態特征、生理生化實驗對其菌種鑒定，結果表明這是一株非脫羧勒克菌(Leclercia adcarboxglata)，屬于腸桿菌科，是非脫羧勒克菌屬的唯一菌種。非脫羧勒克菌生防菌株Wt16的16S rRNA序列見SEQ ID NO.1。

表1：非脫羧勒克菌Wt16的主要生物學特性：

上述非脫羧勒克菌Wt16在抑制黃曲霉菌產生黃曲霉毒素中的應用。具體的應用方法為：

將非脫羧勒克菌wt16發酵獲得的發酵液包覆在生物樣品表面，防治生物樣品的黃曲霉毒素污染。

按上述方案，所述的非脫羧勒克菌Wt16發酵液的終濃度為(1-9)×10⁷CFU/mL。