[發明專利]一種缺血修飾白蛋白的測定方法及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201711228593.7
• 申請日: 2017-11-29
• 公開（公告）號: CN108152225B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 華權高;來祥兵;徐春雷
• 申請（專利權）人: 武漢生之源生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/38
• 代理公司: 武漢藍寶石專利代理事務所(特殊普通合伙) 42242
• 代理人: 嚴超

本發明提供了一種缺血修飾白蛋白的測定方法，利用缺血修飾白蛋白鈷結合能力減弱的特性，使用化學試劑檢測反應體系中的游離鈷，通過吸光度變化表示游離鈷含量變化，間接表示缺血修飾白蛋白的濃度，檢測中所使用的顯色劑為2,4?二巰基嘧啶，用以檢測反應體系中的游離鈷。本發明所用的顯色劑2,4?二巰基嘧啶穩定性更高，分析靈敏度更高，價格較低，檢測結果以游離鈷濃度報告，避免采用吸光度報告時由于儀器或試劑性能差別和不穩定導致IMA檢測結果吸光度不穩定的問題。本發明還提供一種缺血修飾白蛋白檢測試劑盒，包括所述方法所用到的試劑。

技術領域

本發明涉及對人血清中缺血修飾白蛋白進行檢測的方法，尤其涉及一種缺血修飾白蛋白的測定方法及檢測試劑盒。

背景技術

缺血修飾白蛋白(ischemia modified albumin，IMA)是近年來發現的一種理想的心肌缺血標志物，在早期診斷急性冠狀動脈綜合癥中具有獨特的優勢。急性冠狀動脈綜合癥(Acute coronary syndromes ACS) 是指冠狀動脈粥樣硬化斑塊脫落，血小板聚集，血栓形成致使冠狀動脈狹窄、阻塞，引起心肌缺血以及梗死的病理現象，從臨床角度看，涵蓋了一組連續進展的病癥，包括不穩定心絞痛、非ST段抬高的心肌梗死和ST段抬高的心肌梗死。

人血清白蛋白(HSA)是一種循環蛋白，其氨基末端序列為人類所特有，能與金屬鈷、銅和鎳等離子結合，與其它種屬動物白蛋白相比， HSA的金屬結合位點更易受生物化學因素的影響而被降解。人血清白蛋白在氧自由基作用下，其氨基末端結構發生改變，導致其與某些外源性金屬鈷、銅、鎳結合能力減弱的白蛋白，稱為缺血修飾白蛋白(Ischemiamodified albumin IMA)。

研究人員在尋找冠狀動脈綜合癥(ACS)生化標志物時觀察到患者血清白蛋白與外源性Co²⁺結合能力減弱，同時闡明缺血再灌注引起白蛋白改變的機制主要為內皮細胞損傷及細胞外缺氧，酸中毒，自由基損傷，細胞膜能量依賴的鈉鉀泵破壞和游離Co²⁺增多，這些反應在急性心肌缺血后數分鐘內發生。當各種原因引起缺血時，局部血液灌注和供氧減少，組織細胞進行無氧代謝，消耗ATP。同時代謝產物(如乳酸)堆積，導致酸中毒，局部微環境pH下降致使Cu²⁺從循環蛋白的金屬結合位點釋放，在還原劑如VitC存在時，Cu²⁺→Cu⁺，后者可與氧反應生成氧自由基[O^-]，在超氧化物歧化酶(SOD)的作用下，使其轉化為過氧化氫和氧。正常情況下過氧化氫無害，由SOD降解生成水和O₂，當有金屬離子存在時，過氧化氫通過Fenton反應形成 [O^-]，后者具有高度活性，導致蛋白、核酸損傷和脂質過氧化。HSA 易受[O^-]損害，使N-末端序列2-4個氨基酸(天冬氨酸-丙氨酸-絲氨酸 -賴氨酸)發生轉變形成IMA。也有報道是乙酰化或缺失1-2氨基酸。在這一過程中，游離Cu²⁺具有很高的毒性作用。游離Cu²⁺釋放后，血清白蛋白的N-末端序列與其結合，迅速將其清除，當白蛋白在[O^-] 作用下被修飾后，結合Cu²⁺的能力減弱，Cu²⁺從結合位點釋放，再次進入[O^-]的形成過程或與正常的白蛋白結合，這就形成了一個鏈式反應，最終使IMA在缺血數分鐘內迅速升高。理想的心肌缺血標志物應具有以下特征：(1)無論是否具有心肌壞死，都能查出心肌缺血，其他器官缺血、炎癥或壞死時不增高。(2)缺血早期即可查出，升高程度與缺血程度一致。(3)標志物穩定，有足夠的診斷窗口期，12-24 小時內應能恢復至正常，以利于查出再次缺血。

研究表明IMA基本具備理想心肌缺血標志物基本特征，在以下幾個方面具有重要價值：

(1)對于因胸痛或不適來就診的急診患者進行危險分層，對低危患者有助排除ACS診斷。