[發(fā)明專利]一種人的2’-5’-寡腺苷酸合成酶突變蛋白及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711223860.1
• 申請日: 2018-01-22
• 公開（公告）號: CN110066772A
• 公開（公告）日: 2019-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張耀洲;吳玉乾;馮建華;李冬梅;張樹軍;胖鐵良;陳玉皎;王文雅
• 申請（專利權(quán)）人: 天津市湖濱盤古基因科學(xué)發(fā)展有限公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C07K16/40;G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種人的2'?5'?寡腺苷酸合成酶突變蛋白及其應(yīng)用，通過將大量癌癥患者作為研究病例，對病例進行基因檢測并進行分析，確定出人的2'?5'?寡腺苷酸合成酶的突變蛋白，根據(jù)該人的2'?5'?寡腺苷酸合成酶突變蛋白制備基因芯片、單克隆抗體和ELISA試劑盒，為癌癥的基因診斷提供的指引作用，實現(xiàn)癌癥的早診斷、早發(fā)現(xiàn)和相關(guān)治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基因工程領(lǐng)域，尤其涉及一種人的2'-5'-寡腺苷酸合成酶突變蛋白及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

2'-5'-寡腺苷酸合成酶是是干擾素抗病毒、抗細胞增殖過程中的關(guān)鍵酶。由它催化合成的2'-5'寡腺苷酸能激活細胞中的內(nèi)切核糖核酸酶降解病毒的mRNA 及細胞的RNA，從而起到抑制病毒復(fù)制和抗細胞增殖的作用。人的2'-5'-寡腺苷酸合成酶發(fā)生突變會對人類健康造成影響，研究發(fā)現(xiàn)，在對某些癌癥(該癌癥包括肺癌、肝癌、胰腺癌和白血病)患者的外周血進行基因測序的過程中，均發(fā)現(xiàn)患者的2'-5'-寡腺苷酸合成酶發(fā)生了突變，因此，對人的2'-5'-寡腺苷酸合成酶突變的檢測對判斷人體是否患有癌癥具有一定的指引作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種人的2'-5'-寡腺苷酸合成酶突變蛋白及其應(yīng)用。

本發(fā)明技術(shù)方案包括：

第一方面，提供一種人的2'-5'-寡腺苷酸合成酶突變蛋白，其氨基酸序列如 SEQID NO:1所示。

第二方面，提供一種人的2'-5'-寡腺苷酸合成酶的突變蛋白的編碼基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

第三方面，提供一種基因芯片，包括：固相載體和固定在該載體上的核苷酸探針；所述核苷酸探針根據(jù)所述人的2'-5'-寡腺苷酸合成酶突變蛋白的核苷酸序列，與人的2'-5'-寡腺苷酸合成酶正常蛋白的核苷酸序列的比對結(jié)果確定。

優(yōu)選地，所述核苷酸探針為SEQ ID NO:3所示的堿基序列。

第四方面，提供一種特異性識別人的2'-5'-寡腺苷酸合成酶突變蛋白的單克隆抗體，其編碼的氨基酸序列為SEQ ID NO:1所示。

第五方面，提供一種用于檢測人的2'-5'-寡腺苷酸合成酶突變蛋白的抗體的ELISA試劑盒，所述ELISA試劑盒包括：包被有上述單克隆抗體的ELISA酶標(biāo)板、酶標(biāo)二抗、檢測對象的2'-5'-寡腺苷酸合成酶蛋白、樣品稀釋液、包被緩沖液、ELISA酶標(biāo)板洗滌液、顯色液和終止液。

優(yōu)選地，所述酶標(biāo)二抗為稀釋的HRP辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗人IgG。

第六方面，提供一種基于上述任一所述ELISA試劑盒檢測人的2'-5'-寡腺苷酸合成酶突變蛋白的抗體的方法，包括：

a、使用所述包被緩沖液對上述單克隆抗體進行稀釋，并將稀釋后的所述單克隆抗體加樣至ELISA酶標(biāo)板的孔中，并室溫孵育；

b、使用所述樣品稀釋液將檢測對象的2'-5'-寡腺苷酸合成酶蛋白稀釋成不同濃度梯度，并將不同濃度梯度的2'-5'-寡腺苷酸合成酶蛋白分別加樣至ELISA酶標(biāo)板的孔中，并室溫孵育；

c、甩去各孔中的液體，加入所述ELISA酶標(biāo)板洗滌液，洗滌并甩干；

d、加入所述酶標(biāo)二抗，并室溫孵育；

e、甩去各孔中的液體，加入所述ELISA酶標(biāo)板洗滌液，洗滌并甩干；

f、加入所述顯色液，室溫避光孵育，并加入所述終止液終止反應(yīng)；

g、在酶標(biāo)儀上450nm測定OD值。

優(yōu)選地，進一步包括：空白對照實驗。