[發明專利]用于伊馬替尼相關基因C?kit表達水平檢測的引物組、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201711220724.7
• 申請日: 2017-11-29
• 公開（公告）號: CN107868826A
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 廣東大臻醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙)32231
• 代理人: 張文杰

1.一種用于伊馬替尼相關基因C-kit表達水平檢測的引物組，其特征在于，所述引物組包括分別針對C-kit基因和參考基因Actin的特異性引物及探針，其中：

C-kit-RF上游引物：

5’-CAGATTTCAGAGAGCACCAATCA-3’；

C-kit-RR下游引物：

5’-AATGGTCTACCACGGGCTTCT-3’；

C-kit-RP探針：

5’-FAM-TTACTCCAACTTAGCAAACTGCAGCCCCAA-TRAMA-3’；

Actin-RF上游引物：

5’-CCGACAGGATGCAGAAGGAG-3’；

Actin-RR下游引物：

5’-AGGATGGAGCCGCCGAT-3’；

Actin-RP探針：

5’-FAM-ATCAAGATCATTGCTCCTCCTGAGCGC-TRAMA-3’。

2.一種用于伊馬替尼相關基因C-kit表達水平檢測的試劑盒，其特征在于，包括PCR反應液，所述PCR反應液包括針對C-kit基因和參考基因Actin的特異性引物及探針，其中：

C-kit-RF上游引物：

5’-CAGATTTCAGAGAGCACCAATCA-3’；

C-kit-RR下游引物：

5’-AATGGTCTACCACGGGCTTCT-3’；

C-kit-RP探針：

5’-FAM-TTACTCCAACTTAGCAAACTGCAGCCCCAA-TRAMA-3’；

Actin-RF上游引物：

5’-CCGACAGGATGCAGAAGGAG-3’；

Actin-RR下游引物：

5’-AGGATGGAGCCGCCGAT-3’；

Actin-RP探針：

5’-FAM-ATCAAGATCATTGCTCCTCCTGAGCGC-TRAMA-3’；

所述PCR反應液還包括PCR buffer、dNTP、HS Taq酶及超純水。

3.根據權利要求2所述的用于伊馬替尼相關基因C-kit表達水平檢測的試劑盒，其特征在于，還包括陽性對照品、陰性對照品和空白對照品。

4.根據權利要求3所述的用于伊馬替尼相關基因C-kit表達水平檢測的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照品為含C-kit基因的溶液；所述陰性對照品為不含C-kit基因的溶液；所述空白對照品為超純水。

5.一種用于伊馬替尼相關基因C-kit表達水平檢測的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一：取待檢測樣本抽提mRNA，將樣本mRNA進行逆轉錄得到cDNA，以cDNA作為模板；

步驟二：提供如權利要求4所述的試劑盒，取出適量PCR反應液，將所述PCR反應液與適量所述模板混勻；

步驟三：利用權利要求1所述的特異性引物和探針進行實時熒光定量PCR，記錄Ct值，并分別以C-kit標準基因作為陽性對照構建標準曲線，根據樣本的Ct值計算出樣本的底物濃度；比較標準曲線上計算出正常樣本與病變樣本的底物濃度，最終判斷待檢測樣本中的mRNA表達水平。

6.根據權利要求5所述的用于伊馬替尼相關基因C-kit表達水平檢測的方法，其特征在于，所述實時熒光定量PCR的反應條件為：95℃預變性5min；95℃15sec，60℃30sec，捕捉熒光信號，循環40次。