[發明專利]丹參脫毒苗的工廠化繁育方法

在審

• 申請號: 201711220158.X
• 申請日: 2017-11-23
• 公開（公告）號: CN107810855A
• 公開（公告）日: 2018-03-20
• 發明（設計）人: 許文勝
• 申請（專利權）人: 許文勝
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 天津欣達睿誠知識產權代理事務所(普通合伙)12216
• 代理人: 李欣

技術領域

本發明涉及丹參脫毒苗的工廠化繁育方法，特別是品質退化嚴重、產量降低、資源稀缺丹參野生種、栽培種或變異種的工廠化繁育方法，屬于植物品種繁育技術領域。

背景技術

丹參(Salvia miltiorrhza Bunge)是大宗中藥材之一，具有顯著的活血化瘀功效，被廣泛用于治療冠心病、心絞痛、缺血性中風等疾病。目前我國以丹參為原料生產的復方中藥有100多種，涉及的企業百余家，對優質丹參藥材的需求量巨大。但由于常年采挖，丹參野生資源日益減少。目前市場供應的丹參主要以栽培種為主，但在丹參主產區，由于種苗生活力退化、重茬等因素影響，致使丹參的產量非常不穩定。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種高效、快速的工廠化丹參脫毒種苗繁育方法。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種丹參脫毒苗工廠化繁育方法，由以下步驟組成：

(1)選取丹參嫩葉或莖尖進行脫毒處理；

(2)丹參嫩葉或莖尖在初始誘導增殖培養基中培養；

(3)丹參愈傷組織在分化培養基中的分化培養；

(4)丹參幼苗在根誘導培養基中的根誘導培養；

(5)丹參幼苗的煉苗；

(6)丹參幼苗的大田移栽。

所述步驟(1)選取丹參嫩葉或莖尖進行脫毒處理的方法是：選取丹參嫩葉或莖尖進行脫毒處理。

所述步驟(2)丹參嫩葉或莖尖在初始誘導增殖培養基中培養的方法是：將脫毒處理的丹參嫩葉或莖尖置于初始增殖培養基中，24±2℃(優選25℃)無菌室中，光照培養20～30天(優選25天)進行脫分化增殖培養，光強度為1000～3000Lx(優選1000Lx)，光照周期2-3h(光)/22～21h(暗)(優選1h(光)/22h(暗))獲得丹參愈傷組織；

所述步驟(3)丹參愈傷組織在分化培養基中的分化培養的方法是：將獲得的丹參愈傷組織切割成0.2～0.3cm2(優選0.25cm²)小塊置于誘導培養基中進行誘導分化培養，培養條件為：24±2℃(優選25℃)，光照時間為16～18h小時(優選18小時)，獲得分化的丹參幼苗；

所述步驟(4)丹參幼苗在根誘導培養基中的根誘導培養的方法是：將獲得的丹參幼苗轉移至根誘導分化培養基中進行根誘導培養，培養條件：24±2℃(優選23～25℃)，光照時間為16～18h小時(優選18小時)；

所述步驟(5)丹參幼苗的煉苗方法是：丹參幼苗根長至2～3厘米，葉片6～8片時將培養瓶打開，進行一級煉苗處理3～4天(優選3天)；將經過一級煉苗處理的丹參幼苗，從培養基中移出，用水沖洗除掉幼苗植株上帶有的培養基，將其移栽至營養土：蛭石(4∶1～2∶1體積比，優選3∶1體積比)的混合土中，置于24±2℃(優選25℃)溫室大棚中，大棚濕度50～70％(優選60％)，進行二級煉苗處理12～18天(優選15天)；

所述步驟(6)丹參幼苗的大田移栽的方法是：將在溫室中復壯的丹參幼苗連同結合的混合土一起移栽置大田中；移栽當天澆足水，后期田間管理同常規種苗。

進一步優選的丹參脫毒苗工廠化繁育方法如下：

所述步驟(1)中的脫毒處理方法為依次用70～75％酒精漂洗30～50秒，無菌水漂洗1～2分鐘，0.1％升汞處理漂洗8～10分鐘，無菌水漂洗4～5次，每次1～2分鐘。

優選的，所述步驟(1)中的脫毒處理方法為依次用75％酒精漂洗30秒，無菌水漂洗1分鐘，0.1％升汞處理漂洗8分鐘，無菌水漂洗5次，每次1分鐘。

所述步驟(1)中嫩葉為最靠近丹參莖端分生區，新長出的第1～2片葉片；莖尖為丹參莖最端部的分生區，長度為0.2～0.4cm。

優選的，所述步驟(1)中嫩葉為最靠近丹參莖端分生區，新長出的第2～3片葉片；莖尖為丹參莖最端部的分生區，長度為0.3cm。

所述步驟(2)中所述的初始增殖培養基組成為1/2MS培養基、20～40g/L白糖、5.5～7g/L瓊脂粉、0.3～1mg/L 6一BA(6-芐氨基嘌呤)、0.1～0.3mg/L NAA(1-萘乙酸)，pH值5.8～6.0；丹參嫩葉或莖尖的脫分化增殖培養組成為1/2MS、20～40g/L白糖、5～7g/L瓊脂、1～2mg/L6-BA，pH值5.8～6.0。

優選的，所述步驟(2)中所述的初始增殖培養基的組成為1/2MS、30g/L白糖、6g/L瓊脂粉、0.5mg/L 6-BA、0.2mg/LNAA，pH值5.8。