[發明專利]TFN基因的應用及恢復TFN基因缺失導致水稻雄性不育的方法

有效

• 申請號: 201711218597.7
• 申請日: 2017-11-28
• 公開（公告）號: CN108130329B
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發明（設計）人: 梁婉琪;張大兵;楊麗;袁政;陳明姣;羅治靖
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 莊文莉

1.一種水稻生殖發育基因TFN的應用，其特征在于，所述的應用是：通過常規方法敲除或抑制TFN基因，使得常規水稻品種中的TFN基因表達水平降低，進而獲得水稻雄性不育系；

所述水稻生殖發育基因TFN的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述常規水稻品種為9522。

2.如權利要求1所述的水稻生殖發育基因TFN的應用，其特征在于，所述水稻生殖發育基因TFN的堿基序列如SEQ ID NO.4所示。

3.一種恢復TFN基因功能缺失所致的水稻生殖發育異常及雄性不育的方法，其特征在于，使用遺傳轉化手段將所述TFN基因轉化tfn突變體，進而使得tfn突變體恢復野生型生長表型；

所述tfn突變體的基因組序列與野生型9522的序列相比，在TFN基因上有4個堿基的缺失；所述突變發生在第358個氨基酸，缺失的堿基為GAGA；

所述水稻生殖發育基因TFN的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，堿基序列如SEQ IDNO.4所示。

4.如權利要求3所述的恢復TFN基因功能缺失所致的水稻生殖發育異常及雄性不育的方法，其特征在于，所述方法具體包括以下步驟：

A、通過引物擴增包括TFN基因的啟動子和全基因的基因組序列片段，如SEQ ID NO.3所示；

B、將所述基因組序列片段插入雙元表達載體pCAMBIA1301中，得到互補構建的pCAMBIA1301-TFN載體；

C、將所述pCAMBIA1301-TFN載體導入根癌農桿菌EHA105中，得到TFN互補根癌農桿菌EHA105；

D、將TFN互補根癌農桿菌EHA105轉化tfn突變體，再生，獲得恢復野生型生長表型的水稻植株。

5.如權利要求4所述的恢復TFN基因功能缺失所致的水稻生殖發育異常及雄性不育的方法，其特征在于，所述引物序列如SEQ ID NO.5～SEQ ID NO.10所示。

6.一種恢復TFN基因功能缺失所致的水稻生殖發育異常及雄性不育的方法，其特征在于，采用氮源處理tfn突變體，使突變體恢復到野生型的生長表型；

所述tfn突變體的基因組序列與野生型9522的序列相比，在TFN基因上有4個堿基的缺失；所述突變發生在第358個氨基酸，缺失的堿基為GAGA；

所述水稻生殖發育基因TFN的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，堿基序列如SEQ IDNO.4所示。

7.如權利要求6所述的恢復TFN基因功能缺失所致的水稻生殖發育異常及雄性不育的方法，其特征在于，所述氮源處理的具體步驟為：在tfn突變體生長發育的生殖發育初期、花藥發育減數分裂期以及孕穗期，在土壤或水培營養液中施用氮肥。

8.如權利要求7所述的恢復TFN基因功能缺失所致的水稻生殖發育異常及雄性不育的方法，其特征在于，所述氮肥為尿素。

9.如權利要求7所述的恢復TFN基因功能缺失所致的水稻生殖發育異常及雄性不育的方法，其特征在于，所述氮肥的施用量為：每千克土壤中施用0.4～0.6g氮肥，或水培營養液中氮素的濃度為14.4～21.6mM。