[發明專利]一種中性內切果膠酸裂解酶的制備方法

有效

• 申請號: 201711218439.1
• 申請日: 2017-11-28
• 公開（公告）號: CN107937378B
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 莊冉;郝志軍;周廣軍
• 申請（專利權）人: 嘉興溫華環保科技有限公司
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N9/42;C12N9/24;C12N9/20;C12N9/02;C12N9/96;C12N1/20;D21C5/00;C12R1/085
• 代理公司: 北京中政聯科專利代理事務所(普通合伙) 11489
• 代理人: 姚海波

1.一種中性內切果膠酸裂解酶的制備方法，其特征在于，將培養成熟的蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)WENA703由茄瓶斜面接種到種子罐，再到發酵罐進行二級發酵，生產出發酵醪液；

上述發酵醪液經過管式離心、板框過濾、超濾濃縮、紙板硅藻土除菌、標準化制備成中性果膠酸裂解酶活力≥300000u/ml，經防腐處理得到酶活力保持率為95％以上的標準高活力中性果膠酸裂解酶酶液；

其中，蠟樣芽孢桿菌WENA703，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCCNO：M2017368。

2.根據權利要求1所述的中性內切果膠酸裂解酶的制備方法，其特征在于，培養基配方為：山梨糖醇8％、麥麩3％、乳清粉1％、玉米漿1.6％、氯化鈉0.5％、玉米胚芽粉1.5％、水84.4％，其中所述各組分之和為100％。

3.根據權利要求1所述的中性內切果膠酸裂解酶的制備方法，其特征在于，種子罐培養條件：種子罐培養溫度35℃±1℃，攪拌轉速0時120r/min、8時160r/min，罐壓0.1MPa，通氣量0時1：0.20、8時1：0.33，培養周期12小時，種子成熟標準為菌體90％以上呈單體，染色均勻，中性果膠酸酶酶活力不高于200u/ml，pH值6.7左右。

4.根據權利要求1所述的中性內切果膠酸裂解酶的制備方法，其特征在于，發酵罐培養條件：發酵罐培養溫度0時33℃±1℃、6時34℃±1℃，攪拌轉速0時120r/min、8時180r/min，32時140r/min，罐壓0.1MPa，通氣量0時1：0.16、8時1：0.28、32時1：0.2，發酵周期38小時±4小時；放罐條件是：pH值上升至7.0以上，酶活力不再增加、菌體90％以上形成芽孢并有部分發生自溶現象。