[發明專利]一種硫酸軟骨素D四糖的制備方法在審
| 申請號： | 201711216846.9 | 申請日： | 2017-11-28 |
| 公開（公告）號： | CN108070627A | 公開（公告）日： | 2018-05-25 |
| 發明（設計）人： | 李燕妮 | 申請（專利權）人： | 濱州醫學院 |
| 主分類號： | C12P19/04 | 分類號： | C12P19/04;C07H1/06;C07H11/00 |
| 代理公司： | 青島發思特專利商標代理有限公司 37212 | 代理人： | 耿霞 |
| 地址： | 264003 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 硫酸軟骨素 四糖 制備 陰離子交換色譜 鯊魚硫酸軟骨素 凝膠色譜分離 生物化工技術 寡糖單體 確切結構 乙醇沉淀 酶降解 研究 | ||
1.一種硫酸軟骨素D四糖的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)硫酸軟骨素D的酶法降解：鯊魚硫酸軟骨素5g，按5％(W/V)的濃度溶于pH8.0緩沖溶液中，加入50IU硫酸軟骨素AC酶，37℃攪拌酶解48h；反應結束后，加入5倍體積95％乙醇沉淀，冷凍干燥，得到硫酸軟骨素寡糖混合物；
(2)硫酸軟骨素D寡糖混合物的陰離子交換分離：將步驟(1)得到的樣品用0.15mol/L的NaCl溶液溶解成0.1g/mL，色譜柱規格2.6×20cm，Q Sepharose Fast Flow強陰離子交換填料，紫外檢測波長232nm，進樣量10ml，流動相0.15mol/L和1.2mol/L的NaCl溶液，流速1.33mL/min，梯度洗脫，收集所得到的不同組分；
(3)硫酸軟骨素D寡糖的凝膠過濾脫鹽：將步驟(2)收集到的組分進行G-25葡聚糖凝膠過濾脫鹽，脫鹽后濃縮凍干；
(4)硫酸軟骨素D寡糖的凝膠過濾分離：將步驟(3)凍干的樣品用純化水溶解成0.1g/mL，色譜柱1.6×100cm，Bio-Gel P6聚丙烯酰胺凝膠填料，紫外檢測波長232nm，流動相0.2mol/LNaCl溶液，流速0.4mL/min，進樣量2ml，收集所得到的不同組分；
(5)硫酸軟骨素D寡糖的凝膠過濾脫鹽：將步驟(4)收集到的組分進行G-25葡聚糖凝膠過濾脫鹽后濃縮凍干,即得硫酸軟骨素D四糖。
2.根據權利要求1所述的一種硫酸軟骨素D四糖的制備方法，其特征在于：在步驟(2)中，收集硫酸軟骨素D寡糖混合物的陰離子交換分離的最后一個洗脫組分。
3.根據權利要求1或2所述的一種硫酸軟骨素D四糖的制備方法，其特征在于：在步驟(4)中，收集硫酸軟骨素D寡糖凝膠過濾分離后的最后一個洗脫組分。
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