[發明專利]一種微生物發酵生產胞嘧啶核苷的方法

在審

• 申請號: 201711213776.1
• 申請日: 2017-11-28
• 公開（公告）號: CN107723324A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 劉學;徐永鑫;李佳偉;劉存虎
• 申請（專利權）人: 紹興厚普生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12P19/38
• 分類號: C12P19/38
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種微生物發酵生產胞嘧啶核苷的方法，其特征在于，包括以下操作步驟：

步驟一：配置200mL搖瓶培養基于1000mL錐形瓶中，搖瓶培養基配方法：酵母抽提物5g/L，蛋白胨10 g/L，氯化鈉10 g/L，高壓蒸汽滅菌柜內滅菌，121℃、0.1MPa滅菌20min，冷卻至室溫后接種；

步驟二：配置種子罐培養基15L于50L發酵罐內，種子罐培養基為：酵母抽提物6g/L，蛋白胨12 g/L，氯化鈉10 g/L，消泡劑0.1 g/L，高溫蒸汽滅菌保壓0.1MPa、保溫121℃維持15min，冷卻至36℃，搖瓶培養結束后培養液移至滅菌冷卻后的種子罐；

步驟三：配置20L發酵培養基于50L發酵罐內，高溫高壓蒸汽滅菌保壓0.1MPa、保溫121℃維持15min，冷卻至36℃；

步驟四：種子罐培養結束后移種至滅菌冷卻后的發酵罐內；

步驟五：發酵培養過程中攪拌轉速與溶氧水平DO值相關聯，攪拌轉速與溶氧水平DO值關聯通過發酵罐自動化控制系統實現。

2.如權利要求1所述的微生物發酵生產胞嘧啶核苷的方法，其特征在于，配置200mL搖瓶培養基于1000mL錐形瓶中，滅菌接種后，搖床培養10h，搖床轉速250rpm，溫度36℃。

3.如權利要求1所述的微生物發酵生產胞嘧啶核苷的方法，其特征在于，搖瓶培養結束后培養液移至滅菌冷卻后的種子罐，搖瓶培養液200ml占種子罐料液體積1.33%，接種后調節種子罐轉速200rpm，通氣比3vvm，溫度36℃，壓力0.06MPa，培養時間8h。

4.如權利要求1所述的微生物發酵生產胞嘧啶核苷的方法，其特征在于，發酵罐培養基配方法為：酵母抽提物12 g/L，葡萄糖50 g/L，硫酸銨10 g/L，磷酸二氫鉀4 g/L，硫酸鎂2 g/L，氯化鈉2 g/L，氯化鈣0.2 g/L，氯化鋅0.02 g/L，硫酸錳.0002 g/L，硫酸亞鐵6 g/L，消泡劑0.6 g/L。

5.如權利要求1所述的微生物發酵生產胞嘧啶核苷的方法，其特征在于，種子罐移至發酵罐移種量為5L，占發酵罐初始料液體積的25%，移種后調節發酵罐轉速250rpm，通氣比2vvm，溫度初始值36℃，壓力0.06MPa，校正溶氧水平初始DO值為100%。

6.如權利要求1所述的微生物發酵生產胞嘧啶核苷的方法，其特征在于，溶氧水平DO值由初始值100%下降至35%，攪拌轉速自動調節維持DO值35%，發酵罐培養過程中控制溫度為36℃，直至發酵結束。