[發(fā)明專利]針對(duì)賦予膦絲菌素-N-乙酰轉(zhuǎn)移酶抗性的酶的單克隆抗體及檢測方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711212066.7
• 申請(qǐng)日: 2013-10-09
• 公開（公告）號(hào): CN108409864A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: G·單;E·H·馬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 美國陶氏益農(nóng)公司
• 主分類號(hào): C07K16/40
• 分類號(hào): C07K16/40;G01N33/573
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所 11494
• 代理人: 羅天樂

本文描述了用于確定和定量膦絲菌素?N?乙酰轉(zhuǎn)移酶(phosphinothricin?N?acetyl?transferase)存在的單克隆抗體和方法。權(quán)利要求的抗體和方法特別用于確定和定量在轉(zhuǎn)基因植物中表達(dá)的膦絲菌素?N?乙酰轉(zhuǎn)移酶的存在。

本申請(qǐng)是2013年10月9日提交的申請(qǐng)?zhí)枮?01380052572.8(PCT申請(qǐng)?zhí)枮镻CT/US2013/064103)、發(fā)明名稱為“針對(duì)賦予膦絲菌素-N-乙酰轉(zhuǎn)移酶抗性的酶的單克隆抗體及檢測方法”的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。

相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求獲得于2012年10月10日提交的美國專利申請(qǐng)系列號(hào) 61/711,950的權(quán)益。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及的領(lǐng)域是應(yīng)用于旨在檢測由某些轉(zhuǎn)基因植物事件表達(dá)的酶的ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定法)的免疫學(xué)，這些酶可賦予對(duì)草銨膦，即L- 膦絲菌素除草劑的抗性。

背景

編碼膦絲菌素-N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(PAT)(EC 2.3.1.183)的基因常規(guī)地用作植物轉(zhuǎn)基因事件的可選擇標(biāo)記，它們最初是從常見的好氧土壤放線菌——綠色產(chǎn)色鏈霉菌(Streptomyces viridochromogenes)中分離的。PAT酶催化膦絲菌素的乙酰化，將其脫毒為無活性的化合物，導(dǎo)致氨積累和細(xì)胞死亡(Murakami T.， Anzai H.，Imai S.，Satoh A.，Nagaoka K.，Thompson C.J.(1986).Mol Gen Genet 205：42-50；Twell D.，Klein T.M.，F(xiàn)romm M.E.，McCormick S.(1989).Plant Physiol 91：1270-1274.)。因此，表達(dá)PAT的轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞能夠用草銨膦加以選擇。

開發(fā)并銷售用于播種用種子產(chǎn)品(planting seed products)的重組DNA性狀(traits)的公司制訂、執(zhí)行并遵守嚴(yán)格的產(chǎn)品管理計(jì)劃。這些管理計(jì)劃要求對(duì)重組性狀的各種組分使用經(jīng)驗(yàn)證的定量和定性蛋白質(zhì)檢測方法，以跟蹤性狀滲入和種子產(chǎn)生活性，以及監(jiān)測谷物收成。這些檢測方法必須足夠容易使用并且足夠魯棒，以供在GLP和非GLP條件下使用。此外，這些方法必須對(duì)用戶足夠友好，以使農(nóng)民便于在田間、糧商便于在筒倉、海關(guān)官員便于在邊境使用。因此，魯棒、高質(zhì)量、用戶友好的蛋白質(zhì)檢測方法和商業(yè)試劑盒是有用的且必要的。

盡管ELISA在本領(lǐng)域眾所周知，但是開發(fā)能夠在實(shí)驗(yàn)室和田間設(shè)置下重復(fù)檢測一系列植物組織中的特定轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的魯棒、高質(zhì)量、經(jīng)驗(yàn)證的 (validated)ELISA方法既不是瑣碎小事，亦非常規(guī)手段。更具有挑戰(zhàn)性的是發(fā)現(xiàn)特別適合于開發(fā)用于檢測功能性PAT轉(zhuǎn)基因事件的側(cè)向流試紙條(lateral flow strip)和/或ELISA的抗體對(duì)(antibody pairs)。

發(fā)明概要