[發(fā)明專利]一種基于微流控芯片的人常染色體STR基因位點(diǎn)分型方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711211209.2
• 申請日: 2017-11-28
• 公開（公告）號: CN109839417B
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 秦建華;蘇文濤;姜雷
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 沈陽晨創(chuàng)科技專利代理有限責(zé)任公司 21001
• 代理人: 鄭虹

1.一種基于微流控芯片的人常染色體STR基因位點(diǎn)分型方法，其特征在于：包括下列步驟：

(1) 選擇電泳體系：進(jìn)樣緩沖液體系由50mmol/L三羥甲基氨基甲烷、50mmol/L N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸、1mmmol/L乙二胺四乙酸組成1×TTE緩沖液，pH8.3 ；樣本分離體系由POP 4 或 POP 7膠組成；

(2) 選擇電泳芯片：芯片包括樣品池、樣品廢液池、緩沖液池、緩沖液廢液池及十字管道；所述十字管道的橫臂左右兩端分別向垂直于縱臂方向延伸，并分別與緩沖液廢液池及緩沖液池相通，十字管道的縱臂上端與樣品池相通，十字管道的縱臂下端與通過U形延伸段后與樣品廢液池相通；在十字管道的交叉處與緩沖液廢液池之間的橫臂上設(shè)置檢測點(diǎn)；

（3）芯片表面修飾：首先將芯片置于真空干燥器中抽真空10分鐘；取出芯片，立即向芯片通道中加入1M NaOH 65℃保持15min，抽干NaOH，加入1M HCl，室溫保持15 min，抽干后加入0.1%-0.5% 聚N-羥乙基丙烯酰胺，室溫保持 1小時(shí)，最后以乙腈抽干微通道置于室溫備用；

(4) 常染色體STR位點(diǎn)選擇:選擇五個(gè)常染色體基因座位點(diǎn)進(jìn)行標(biāo)記，組成5個(gè)常染色體STR基因座復(fù)合擴(kuò)增體系；作為電泳待測樣品；所述五個(gè)常染色體基因座位點(diǎn)分別是TPOX，vWA，D5S818，F(xiàn)GA和D2S1338；標(biāo)記具體為：5個(gè)基因座分成兩組，用HEX標(biāo)記TPOX和D2S1338，用TAMRA標(biāo)記vWA、D5S818和FGA，分子量內(nèi)標(biāo)用第三色熒光染料ROX標(biāo)記，組成5個(gè)常染色體STR基因座復(fù)合擴(kuò)增體系，作為電泳待測樣品；

(5) 電泳：用1×TTE緩沖液浸洗2分鐘；樣品廢液池、緩沖液池和緩沖液廢液池加入緩沖液后，樣品池中注入待測樣品；進(jìn)樣階段，樣品池0V，樣品廢液池+800V，緩沖液池+200V，緩沖液廢液池+700V，進(jìn)樣10 秒后切換電壓進(jìn)入分離階段；分離時(shí)，緩沖液廢液池+3600V，緩沖液池0V，樣品池和樣品廢液池均施加+900V，運(yùn)行溫度為25℃；得到五個(gè)常染色體基因座位點(diǎn)的出峰時(shí)間。

2. 根據(jù)權(quán)利要求1 所述的一種基于微流控芯片的人常染色體STR基因位點(diǎn)分型方法，其特征在于：所述芯片大小為63mm×30mm，芯片管道寬90μm，深30μm，芯片樣品池到十字交叉點(diǎn)長5mm，有效分離長度為160mm，樣品池、樣品廢液池、緩沖液池和緩沖液廢液池的直徑均為2mm。