[發明專利]一種利用響應面法優化油橄欖葉總黃酮的提取方法

在審

• 申請號: 201711210460.7
• 申請日: 2018-01-22
• 公開（公告）號: CN107875199A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發明（設計）人: 丁春邦;王布雷;王碧霞;徐洲;李天;劉靜;周莉君;黃燕;廖進秋;袁明;楊瑞武
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: A61K36/63
• 分類號: A61K36/63;A61P39/06;A61K8/9789;A61Q19/08;A23L29/00
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司11246
• 代理人: 夏艷

1.一種利用響應面法優化油橄欖葉總黃酮的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)樣品溶液制備：

準確稱取油橄欖葉粉末，加甲醇水浴熱浸提，3000-5000轉離心8-15min，收集上清液后定容；

(2)用AlCl₃顯色法測定并計算總黃酮含量；

所述的AlCl₃顯色法，包括以下步驟：取待測液2mL，加4mL AlCl₃(1％)試劑，30％甲醇定容至25mL，搖勻避光，靜置10min，于415nm檢測吸光值；以蘆丁標準液濃度為x軸、吸光度為y軸，繪制標準曲線；所得回歸方程為y＝0.0359x-0.0012，R²＝0.9993；

總黃酮含量(％)＝樣品液中總黃酮質量濃度×樣品液體積×稀釋倍數/初始油橄欖葉質量/1000×100；

(3)實驗設計和統計分析；

A、單因素試驗；

以油橄欖葉總黃酮含量為指標，考察甲醇濃度(60、70、80、90、100％，固定料液比1:40，時間180min，溫度70℃)、提取時間(60、120、180、240、300min，固定料液比1:40，甲醇濃度70％，溫度70℃)、提取溫度(60、70、80、90、100℃，固定料液比1:40，時間180min，甲醇濃度70％)、料液比(1:10、1:20、1:30、1:40，固定甲醇濃度70％，時間180min，溫度70℃)4個因素對總黃酮含量的影響；

B、響應面優化試驗方法；

在單因素試驗結果的基礎上，采用Design-Expert 8.0(RSM)軟件設計試驗條件，選用Box-Behnken(BB)模型，以油橄欖葉總黃酮含量為響應值y，甲醇濃度(A)、料液比(B)、提取溫度(C)、提取時間(D)為自變量，設計4因素3水平響應面試驗，建立多元二次回歸方程：

Y＝3.10+0.34A+0.070B+0.063C-0.095D+0.035AB+0.018AC+0.19AD-0.050BC+0.095BD+0.25CD-0.58A²-0.35B²-0.46C²-0.31D²；

(4)數據處理

采用Microsoft Excel 2010、SPSS 17.0對實驗數據進行統計分析處理；所有試驗均重復三次。

2.如權利要求1所述的利用響應面法優化油橄欖葉總黃酮的提取方法，其特征在于，最佳提取工藝為：甲醇濃度82％、料液比1:29g/mL、提取溫度90℃、提取時間106min。