[發明專利]一種茶葉熱穩定性蛋白納米顆粒及其制備方法

在審

• 申請號: 201711210406.2
• 申請日: 2017-11-28
• 公開（公告）號: CN107987119A
• 公開（公告）日: 2018-05-04
• 發明（設計）人: 丁偉;柯李晶;周建武;饒平凡
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/18;C07K1/34;C07K1/36
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種茶葉熱穩定性蛋白，其特征在于：所述茶葉熱穩定性蛋白為水溶性蛋白，N-端一級結構序列為GDESPETL；所述蛋白的制備方法，具體包括以下步驟：

1）茶葉熱穩定性蛋白粗提液的制備：以料液質量比1:3將茶葉鮮葉加入4℃預冷的含0.05M pH 7.2 Tris-鹽酸緩沖液、10wt.%PVPP、5M尿素、1mM PMSF、1mM EDTA、5wt.% NaHSO₃的水溶液，冰浴上研磨，4℃漿液浸提3h，紗布過濾，濾過液4℃12000rpm離心30min，取上清，得鮮葉蛋白粗提液；

2）茶葉熱穩定性蛋白的離子交換色譜分離：將10mL茶葉熱穩定性蛋白初提液流加至以含5M尿素的0.02 mol/L、pH9.0Tris-鹽酸緩沖液平衡的UNO Q陰離子色譜柱，以同樣濃度Tris-鹽酸緩沖液繼續平衡3倍柱體積后，再以含0～0.65mol/L NaCl、5M尿素的0.02 mol/L、pH9.0Tris-鹽酸緩沖液線性梯度洗脫100 mL，最后用含0.65 mol/L NaCl 、5M尿素的0.02 mol/L、pH9.0 Tris-鹽酸緩沖液洗脫1個柱體積，流速1 mL/min，紫外分光光度計測量波長為280 nm，經過色譜分離的組分以自動分布收集儀收集，后以SDS-PAGE進行蛋白成分鑒定；

3）茶葉熱穩定性蛋白的基本性質表征：以SDS-PAGE測定該經純化得到的茶葉熱穩定性蛋白的分子量大小，以等點聚焦測定該茶葉熱穩定性蛋白的等電點，以Edman degradation測定該茶葉熱穩定性蛋白的N-端一級結構序列。

2.根據權利要求1所述的一種茶葉熱穩定性蛋白，其特征在于：所述的茶葉熱穩定性蛋白分子量為66.0kDa、等電點為4.82。

3.一種茶葉熱穩定性蛋白納米顆粒，其特征在于：茶葉熱穩定性蛋白納米顆粒由權利要求1中所述茶葉熱穩定性蛋白組成，15個茶葉熱穩定性蛋白單體形成一個球體的蛋白納米顆粒，該納米顆粒其平均粒徑為75±1.3 nm，表面電荷呈負性，范圍在-24.7±0.6mV。

4.一種如權利要求3所述的一種茶葉熱穩定性蛋白納米顆粒的制備方法，其特征在于：所述的茶葉熱穩定性蛋白納米顆粒的制備方法包括：將該茶葉熱穩定性蛋白配制為0.11mg/mL的pH 5.05鹽溶液，經過30℃加熱30min，利用分子截留量為100 kDa的超濾離心管進行超濾去除未反應的茶葉熱穩定性蛋白，即獲得茶葉熱穩定性蛋白納米顆粒。

5.根據權利要求4所述的一種茶葉熱穩定性蛋白納米顆粒的制備方法，其特征在于：所述的鹽溶液為Tris-鹽酸溶液。