[發明專利]一種抗菌肽-殼聚糖復合物、其制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201711210053.6
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN107997984A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發明（設計）人: 黃亞東;項琪;肖巧學;貝煜
• 申請（專利權）人: 肽源（廣州）生物科技有限公司;廣州暨南大學醫藥生物技術研究開發中心
• 主分類號: A61K8/73
• 分類號: A61K8/73;A61K8/64;A61K8/02;A61Q19/00;A61Q17/00;A61P17/10;A61P17/02;A61P31/02;A61P31/04
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 陳曉娜

1.一種抗菌肽-殼聚糖復合物，其中抗菌肽上的羧基和殼聚糖上的氨基通過酰化反應偶聯。

2.權利要求1所述的抗菌肽-殼聚糖復合物，其中所述抗菌肽選自SEQ ID Nos.1-4所示的肽中的一種或幾種。

3.權利要求2所述的抗菌肽-殼聚糖復合物，其中所述抗菌肽為SEQ ID No.1、SEQ IDNo.2或它們的組合。

4.權利要求1所述的抗菌肽-殼聚糖復合物，其中所述抗菌肽-殼聚糖復合物中的殼聚糖部分選自殼聚糖、季銨鹽化殼聚糖、磺酸化殼聚糖或磷酸化殼聚糖，其中它們的分子量為3.5～10KD。

5.一種制備權利要求1-4中任一項的抗菌肽-殼聚糖復合物的方法，所述方法包括下述步驟：

(1)稱取50～100mg殼聚糖，溶解于10～50mL pH 6～7的PBS緩沖液，

(2)精密稱取50～100mg抗菌肽，溶解于10～30mL pH 6～7的PBS緩沖液，

(3)精密稱取40～100mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和50～250mgN-羥基琥珀酰亞胺，加入至步驟(2)制得的包含抗菌肽的PBS溶液中，4℃避光攪拌十分鐘，活化羧基，

(4)將步驟(1)制得的殼聚糖溶液滴加入步驟(3)制得的包含抗菌肽、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的PBS溶液中，4℃避光攪拌過夜，

(5)轉移步驟(4)的溶液至截留分子量為6～8kDa的透析袋中，在4℃避光條件下，用超純水透析24小時除去1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和游離的殼聚糖，即得到所述抗菌肽-殼聚糖復合物。

6.根據權利要求5所述的方法，所述方法還包括下述步驟：

(6)將步驟(5)得到的透析液凍干，-20℃保存。

7.一種抗菌肽-殼聚糖-細胞生長因子的納米粒，其中所述細胞生長因子被包裹在權利要求1-4中任一項所述的抗菌肽-殼聚糖復合物中，其中所述抗菌肽-殼聚糖復合物與所述細胞生長因子的摩爾比在10∶1～1∶5的范圍內，優選為5∶1。

8.權利要求7所述的抗菌肽-殼聚糖-細胞生長因子的納米粒，其中所述細胞生長因子選自成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子、角朊細胞生長因子或它們的任意組合，優選表皮細胞生長因子。

9.制備權利要求7所述的抗菌肽-殼聚糖-細胞生長因子的納米粒的方法，所述方法包括下述步驟：

(1)室溫下(25℃)，將權利要求1-4中任一項的抗菌肽-殼聚糖用1％醋酸配制成0.5～2mg mL-1的抗菌肽-殼聚糖醋酸溶液，用0.1～1mol L-1NaOH調節pH值至5～6，

(2)向步驟(1)的溶液中加入10～20μg細胞生長因子，恒溫磁力攪拌器控制溫度25～40℃，轉速200～400r min-1，緩慢滴加濃度為0.5～2mg mL-1的多聚磷酸鈉(TPP)水溶液，滴加完畢后繼續攪拌15min，得到抗菌肽-殼聚糖-細胞生長因子納米粒混懸液，

(3)將步驟(2)制得的混懸液以1w～3w r min-14℃離心30～60min，收集沉淀物，分散在注射用水中，-40℃冷凍干燥得到抗菌肽-殼聚糖-細胞生長因子納米粒凍干粉，避光儲存。

10.一種化妝品，其包含有效量的權利要求7或8所述的抗菌肽-殼聚糖-細胞生長因子的納米粒，優選地，所述化妝品為凝膠劑、脂質體或乳液劑型。