[發明專利]篩選誘導的多能干細胞的方法

有效

• 申請號: 201711208330.X
• 申請日: 2012-07-25
• 公開（公告）號: CN107988381B
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 山中伸彌;高橋和利;小柳三千代;大貫茉里
• 申請（專利權）人: 國立大學法人京都大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6881;G01N33/50
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 李平;鄭霞

本發明涉及篩選誘導的多能干細胞的方法。本發明提供使用認定為特異性表達于展現分化抗性的iPS細胞系的lincRNA或mRNA的標志物篩選展現分化抗性的iPS細胞的方法，和這樣的標志物。

本申請是申請日為2012年7月25日，申請號為201280036781.9，發明名稱為“篩選誘導的多能干細胞的方法”的申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及篩選誘導的多能干細胞的方法。更特別地，本發明涉及在誘導的多能干細胞中通過確認大的基因間的非編碼RNA(large intergenic non-coding RNA，lincRNA)或mRNA的表達篩選不展現分化抗性的誘導的多能干細胞的方法。

背景技術

近年來，已相繼建立了小鼠和人誘導的多能干細胞(iPS細胞)。Yamanaka等人通過將Oct3/4、Sox2、Klf4和c-Myc基因導入小鼠來源的成纖維細胞以啟用這些基因的強制表達誘導了iPS細胞(WO 2007/069666A1和Takahashi,K.和Yamanaka,S.,Cell,126:663-676(2006))。接著，已經表明iPS細胞也能用以上因子的3個來制備(除了c-Myc基因)(Nakagawa，M.等人，Nat.Biotechnol.,26:101-106(2008))。而且，Yamanaka等人通過將以上4個基因導入人皮膚來源的成纖維細胞，成功建立了iPS細胞，與涉及小鼠的情況相似(WO2007/069666 A1和Takahashi,K.等人，Cell,131:861-872(2007))。同時，Thomson等人的小組使用Nanog和Lin28代替Klf4和c-Myc制備了人iPS細胞(WO 2008/118820 A2和Yu,J.等人，Science，318:1917-1920(2007))。iPS細胞能解決生物倫理問題例如胚胎的破壞，能在維持其多能性的同時生長，使得iPS細胞被預期作為再生醫學的移植材料。

同時，即使當這樣建立的iPS細胞被誘導以分化為特異性的組織細胞時，產生的細胞可能包括具有增殖能力的未分化(或未充分分化的)細胞(Miura K.等人，NatBiotechnol.,27:743-745(2009))。在這種情況下，有移植后腫瘤發生的顧慮。因此，在這樣建立的iPS細胞系中篩選不含有對分化誘導展現抗性的細胞的iPS細胞系的方法是希望得到的。

發明概述

技術問題

本發明的目標是有效地選擇適合臨床應用的安全的iPS細胞(誘導的多能干細胞)。特別地，本發明的目標是提供篩選不展現分化抗性的細胞系的方法。

問題解決方案

為達到以上目標，本發明人使用展現分化抗性的iPS細胞系和不展現分化抗性的iPS細胞系研究了特異性表達于展現分化抗性的iPS細胞系的RNA或特異性表達于不展現分化抗性的iPS細胞系的RNA。因此確認，由特定基因組區編碼的大的基因間的非編碼RNA(lincRNA)或mRNA特異性表達于展現分化抗性的iPS細胞系或不展現分化抗性的iPS細胞系中。

基于以上結果，本發明人已經發現，通過使用由特定基因組區編碼的大的基因間的非編碼RNA(lincRNA)或mRNA作為指示物(標志物)可篩選展現分化抗性的iPS細胞，因此完成了本發明。

特別地，本發明包括下列[1]到[9]。

[1]一種篩選不展現分化抗性的人誘導的多能干細胞系的方法，包含如下步驟：

(i)測定選自A組和/或B組的至少一個大的基因間的非編碼RNA(lincRNA)或mRNA的表達，

(ii)選擇其中選自A組的lincRNA或mRNA表達或其中選自B組的lincRNA或mRNA不表達的人誘導的多能干細胞系；

A組由以下組成：