[發明專利]改良螺旋藻關鍵酶基因提高生長固碳速率的方法

有效

• 申請號: 201711206657.3
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN107988129B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 程軍;岑可法;周俊虎;劉建忠;王智化;張彥威;楊衛娟;周志軍;何勇
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12R1/01
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 周世駿

1.一種改良螺旋藻關鍵酶基因提高生長固碳速率的方法，其特征在于，包括下述步驟：

（1）利用基因編輯技術對螺旋藻細胞中的四個關鍵酶葉綠素合成酶bchG、雙香葉基還原酶bchP以及二氫硫辛酰胺脫氫酶DLD、烏頭酸水合酶ACO的基因表達量進行上調，以實現基因改良；

（2）取基因改良后的螺旋藻藻株，置于光生物反應器中進行多試管單個藻株純化和擴大培養；

（3）每天采集各試管中的藻液，測試螺旋藻的固定二氧化碳速率，取固定二氧化碳速率的數值最大的樣本作為改良后的螺旋藻藻株。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，在光生物反應器中的培養條件為：采用螺旋藻標準培養基，藻液體積為300毫升，控制藻液接種密度為0.1克/升，溫度為27℃，光照強度為7000Lux，持續通入空氣流量為30毫升/分鐘。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中，螺旋藻固定二氧化碳速率的測試具體包括以下步驟：

a、每天取各藻液樣品10毫升，用離心機7500轉/分鐘離心5分鐘，倒掉上清液；然后在105°C下烘干24小時至恒重，稱量并計算生物質密度DW；

b、螺旋藻生長速率的計算方法如下：u(g/L/day)=（DW₂-DW₁）/（t₂-t₁），其中DW₂為t₂=第5天時的生物質密度(g/L)，DW₁為t₁=第4天時的生物質密度(g/L)；

c、螺旋藻固定二氧化碳速率的計算方法如下：R(g/L/day)=u×C×44/12，其中C為t₂=第5天時和t₁=第4天時測得螺旋藻生物質中碳元素重量百分比的平均值。